2012 Fiscal Year Annual Research Report
上皮組織における細胞膜上プロテアーゼ制御機構の破綻が引き起こす病態の解析
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24390099
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | University of Miyazaki |
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Principal Investigator |
片岡 寛章 宮崎大学, 医学部, 教授 (10214321)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
竹田 直樹 熊本大学, 生命資源研究支援センター, 助教 (90304998)
石田 洋一 明治薬科大学, 医歯薬学部, 助教 (90510454)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 病理学 / 癌 / 発がん / 浸潤・転移 / プロテアーゼインヒビター / プロテアーゼ / HAI-1 / 遺伝子改変マウス |
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| Research Abstract |
細胞周囲微小環境におけるプロテアーゼ活性は、多細胞生物の様々な生命現象に深く関与する。本研究では、細胞膜結合セリンプロテアーゼインヒビターHAI-1(HGF activator inhibitor-1)の上皮組織の病態形成(特に腫瘍)における意義を解析する。本年度は、腸管上皮発癌と口腔扁平上皮癌(OSCC)の浸潤・転移におけるHAI-1の意義について検証した。
(1)腸管上皮HAI-1欠損マウスでは腸管化学発癌刺激による大腸発癌が亢進することを見出した。
(2)腸管上皮HAI-1欠損APC変異マウスを作成し、HAI-1欠損によりAPC変異マウスの腸管腫瘍形成率が亢進し生存期間も大幅に短縮する事を明らかにした。腫瘍および非腫瘍組織のHGF活性化の検討と網羅的遺伝子発現解析を行い、HAI-1欠損によるHGF活性化亢進とHAI-1欠損に伴い発現亢進する遺伝子群を明らかにした。
(3)ヒト大腸癌組織におけるHAI-1発現パターンを検証し、癌細胞において膜結合HAI-1が減少することを示した。
(4)大腸癌における膜結合型HAI-1の減少はMT1-MMPによるHAI-1切り出しの結果生じる可能性を示した。
(5)上記(1)-(4)の結果を論文として投稿し、受理された(Cancer Res)。
(6)OSCCの浸潤とリンパ節転移におけるHAI-1の意義を免疫組織化学的に検証し、癌細胞膜上HAI-1の消失とリンパ節転移に相関があること、培養OSCC細胞株SASのHAI-1ノックダウンによって上皮間葉移行が生じることを明らかにし、論文として発表した(J Pathol)。また、数種類のOSCC細胞株と膵癌細胞株を用いてHAI-1ノックダウン株の作成を行い、今後の研究ツールとして準備した。
(7)テトラサイクリンで気管支上皮特異的にHAI-1遺伝子欠失誘導が可能なマウスを作成した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初計画した研究計画に沿って研究を行い、平成24年度の中心的な課題である腸管特異的HAI-1ノックアウトマウスを用いた腸管発がんにおけるHAI-1の意義については計画通り達成し、論文発表に至った。癌細胞株を用いた安定的HAI-1抑制株の作製は口腔扁平上皮癌については予定通り達成し、また膵癌についても順調に作成が進んでいる。気管支上皮特異的HAI-1欠損マウスの作製は予定通り達成した。HGF activatorの新規基質探索については、まだ成果を得るには至っておらず、継続中である。以上のことから、研究はおおむね順調に進展している。
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| Strategy for Future Research Activity |
申請者が作成した条件付きHAI-1ノックアウトマウスの系が、HAI-1機能の研究に有効であることが示されたことから、今後も条件付きHAI-1ノックアウトマウスの系を用いたin viva機能解析を継続していく。また、主にin vitroの系を用いて、腫瘍細胞におけるHAI-1の標的酵素について、膜上HAI-1の欠失がおよぼす影響について解析する。なお、癌細胞膜上のHAI-1消失においてMT1-MMPが重要な役割を有することが示唆されたことから、当初の計画には含まれていなかったMT1-MMPによるHAI-1切り出しによるHAI-1標的酵素の活性変動とHGFをはじめとする生理活性物質活性化の変化についても、種々の上皮系腫瘍細胞株とMT1-MMP発現誘導可能な不死化マウス腸上皮細胞株で検討する。
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[Journal Article] Identification of CCDC6-RET fusion in a human lung adenocarcinoma cell line, LC-2/ad.2012
Author(s)
Matsubara D, Kanai Y, IshikawaS, Ohara S, Yoshimoto T, SakataniT, Oguni S, Tamura T, Kataoka H, Endo S, Murakami Y, AburataniH, Fukayama M, Niki T.
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Journal Title
Journal of Thoracic Oncology
Volume: 7
Pages: 1872-1876
DOI
Peer Reviewed
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