2012 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子ノックアウトによりファンコニ症候群様所見を示す膜蛋白の発見とその意義の解明
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24390217
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
金井 好克 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (60204533)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大垣 隆一 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (20467525)
永森 收志 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (90467572)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 腎臓学 / 腎生理学 |
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| Research Abstract |
バイオインフォマティクスによる解析から、多数の近位尿細管管腔側輸送体と共発現変動する遺伝子を見いだし、そのノックアウトマウスを作製したところ、Fanconi症候群類似の、糖、アミノ酸、尿酸の尿中排泄の顕著な上昇を示した。そのコードする蛋白TRAPは、2回膜貫通型の新規膜蛋白であり、腎特異的な発現を示し、近位尿細管管腔側膜に局在していた。本研究は、網羅的解析を適用してTRAPノックアウトマウスの表現型解析を行い、TRAPにより局在が制御される管腔側輸送体群の全体像と、それらの局在をTRAPが維持する機構を明らかにすることを目的とし、加えて、ヒトでの遺伝子変異の探索を行いFanconi症候群との関連性へとアプローチを目指す。
平成24年度は、近位尿細管管腔側膜で多くの輸送体の機能を維持するTRAPの役割をつかむために、TRAPノックアウトマウス尿中のグルコース、尿酸、多種のアミノ酸の漏出の詳細なデータを収集し、ノックアウトマウスと野生型マウスの尿中漏出有機化合物を詳細に比較した。加えて、尿中電解質排泄量、尿pH等についても生化学検査でデータを収集した。同時に、腎機能の総合的評価をおこなった。さらに野生型、ノックアウトマウスの腎皮質刷子縁膜小胞を調製し、尿中排泄量に変化の見られた化合物のうち、放射性標識物が入手可能な化合物について尿中排泄量の変動が輸送機能の変化によるものであることを明らかにするため、輸送活性の測定をするための解析系を立ち上げた。また、野生型マウスとTRAPノックアウトマウスの管腔側膜上での各輸送体の存在量を網羅的比較定量プロテオミクスによって比較した。抗体が入手可能な輸送体については、ウエスタンブロットを行い、TRAPが近位尿細管管腔側膜上のそれらの輸送体の存在量を維持していることを示唆する結果を得た。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ノックアウトマウスの尿中漏出有機化合物解析については、生化学手法を用いて一定の成果を得ている。腎皮質刷子縁膜小胞を用いた輸送体の機能活性解析については、解析系の確立は行ったが、活性評価には及んでいない。一方で、網羅的比較定量プロテオミクスを用いた解析に関しては当初の予定以上の成果を得ている。
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| Strategy for Future Research Activity |
網羅的比較定量プロテオミクスを用いて近位尿細管管腔側膜の輸送体の網羅的な変動解析を行い、全体像を明らかにする。またヒトでの遺伝子変異の探索を進める。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
一部消耗品がキャンペーンにより想定より安価に入手可能だったため、該当助成金が発生した。翌年度の研究費と合算し、消耗品費として使用する。
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Research Products
(42 results)
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[Journal Article] IUPHAR-DB: updated database content and new features.2013
Author(s)
Sharman JL, Benson HE, Pawson AJ, Lukito v, Mpamhanga CP, Bombail v, Davenport AP, Peters JA, Spedding M, Harmar AJ, NC-IUPHAR; Alexander SP, Bonner TI, Catterall WA, Christopoulos A, Davenport AP, Dollery CT, Enna S, Harmar AJ, Kaibuchi K, Kanai Y, Laudet v, Neubig RR, Ohlstein EH, Peters JA, Pin JP, Ruegg U, Spedding M, Wright M W, du Souich P.
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Journal Title
Nucleic Acids Res
Volume: 41
Pages: D1083-D1088
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Biological evaluation of 3-[<18)F]fluoro-a-methyl-D-tyrosine .(D-[(18)F]FAMT) as a novel amino acid tracer for positron emission tomography2013
Author(s)
Ohshima Y, Hanaoka H, Tominaga H, Kanai Y, Kaira K, Yamaguchi A, Nagamori S, Oriuchi N, Tsushima Y, Endo K, Ishioka NS
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Journal Title
Ann Nucl Med
Volume: Jan 23(Epub ahead of print)
Peer Reviewed
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[Journal Article] How to use the IUPHAR receptor database to navigate pharmacological data.2012
Author(s)
Mpamhanga CP, S harm an JL, Harmar AJ; NC-IUPHAR; Alexander SP, Bonner TI, Catterall WA, Christopoulos A, Davenport AP, Dollery CT, Enna S, Harmar AJ, Kaibuchi K, Kanai Y, Laudet V, Neubig RR, Oh I stein EH, Peters J, Pin JP, Ruegg U, du Souich P, Spedding M, Wright MW.
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Journal Title
Methods Mol Biol.
Volume: 897
Pages: 15-29
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] L-type amino acid transporter l: a cause of the tumor uptake in PET2012
Author(s)
Wiriyasermkul Po Nagamori S, Tominaga H, Oriuchi N, Kaira K, Nakao H, Kitashc!ji T, 0hgaki R, Tanaka H, Endou H, Endo K, Sakurai H, Kanai Y.
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Journal Title
J Nucl Med
Volume: 53
Pages: 1253-1261
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Prognostic significance of L-type amino-acid transporter I expression in surgically resected pancreatic cancer.2012
Author(s)
Kaira K, Sunose Y, Arakawa K, Ogawa T, Sunaga N, Shimizu K, Tominaga H, Oriuchi N, Itoh H, Nagamori S, Kanai Y, Segawa A, Furuya M, Mori M, Oyama T, Takeyoshi l.
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Journal Title
Br J Cancer
Volume: 107
Pages: 632-638
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] NRFL-1, the C. elegans NHERF orthologue, interacts with amino acid transporter 6 (AAT-6) for age-dependent maintenance of AAT-6 on the membrane.2012
Author(s)
Hagiwara K, Nagamori S, Umemura YM, Ohgaki R, Tanaka H, Murata D, Nakagomi S, Nomura KH, Kage-Nakadai E, Mitani S, Nomura K, Kanai Y.
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Journal Title
PLoS One
Volume: 7
Pages: e43050
DOI
Peer Reviewed
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