2012 Fiscal Year Annual Research Report
出生後早期の臍帯血細胞移植による未熟肺血管床発育動態に関する研究
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24390331
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
北川 哲也 徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス研究部, 教授 (80240886)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
北市 隆治 徳島大学, 大学院・ヘルスバイオサイエンス研究部, 准教授 (20335813)
中川 竜二 徳島大学, 大学病院, 助教 (10403685)
前田 和寿 徳島大学, 大学病院, 准教授 (30294680)
菅野 幹雄 徳島大学, 大学病院, 特任助教 (70563807)
中山 泰介 徳島大学, 大学病院, 医員 (80582791)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 臍帯血 / 細胞移植 / 未熟肺血管床 |
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| Research Abstract |
8週齢の雌性C57/BL6野生型マウスの気管内挿管下に人工呼吸器を装着し、左肺切除モデル作りを行った。しかし、安定した生存率を得られ、ヒト臍帯血細胞移植のレシピエントとして用いるには技術的な困難さがあった。そこで、本研究の肺血管床減少性レシピエント動物モデルとしては、モノクロタリン(MCT)誘発肺高血圧モデルマウスを用いることとした。
本施設倫理委員会の承認下に、本研究に対する同意を得た産婦(ヒト)の分娩時に臍帯静脈血を採取した。ヒト臍帯血細胞の解析ではCD34+、CD45+、CD133+前駆細胞は全体の1.02%を占め、0.25m1中にそれらを2.57%に濃縮された1×107個の単核球細胞を含む投与液として調整した。
免疫欠損(BALB/cSlc-nu/nu)モノクロタリン(MCT)誘発肺高血圧モデルマウスにヒト臍帯血細胞を眼窩静脈より移植すると、心筋リモデリングの携帯観察やマウス心エコー法による肺動脈血流波形の加速時間acce1eration time : AT(msec)と駆出時間ejection time : ET(msec)の比AT/ETの検討から、肺血管の再生に伴って肺血管床を改善できることを確認した。また、その効果発現にはヒト臍帯血の血清成分ではなく移植細胞自体が必要であった。
次に移植したヒト臍帯血細胞をDi-1(カルボシアニン蛍光)にてラベルし、レシピエントマウス肺内での存在、動態(viability,activity)を、移植3時間後,24時間後および7日後と経時的に追跡している。また、バイオイメージング法やRT-PCR法にて肺組織内で血管新生のために動員された細胞の起源を特定する研究を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
8週齢の雌性C57/BL6野生型マウスの気管内挿管下に人工呼吸器を装着し、左肺切除モデル作りを行った。
しかし、安定した生存率を得られ、ヒト臍帯血細胞移植のレシピエントとして用いるには技術的な困難さがあった。
そこで、本研究の肺血管床減少性レシピエント動物モデルとしては、モノクロタリン(MCT)誘発肺高血圧モデルマウスを用いることとした。
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| Strategy for Future Research Activity |
1)肺内の血管新生因子発現の遺伝学的検索する.2)移植細胞のマウス体内動態の追跡する.移植したヒト臍帯血細胞のレシヒ゜エントマウス肺内での存在,動態を,RT-PCR法にて経時的に観察,追跡する.また、移植細胞をDi-I(カルボシアニン蛍光)にてラベルし、経時的にレシピエントマウス肺内での移植臍帯血細胞の存在,動態を確認する.3)血管新生のために動員された細胞の起源を特定する.細胞移植後の肺組織標本をヒト抗体で免疫染色することにより,ドナーとレシピエントのどちらの細胞がどの程度の比率でレシピエント肺血管床の改善に関与しているか判定する.
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
当該年度に1000円の残高が生じ、次年度の研究経費にあたることとします。
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