2013 Fiscal Year Research-status Report
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24580284
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| Research Institution | Nihon University |
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Principal Investigator |
森友 忠昭 日本大学, 生物資源科学部, 教授 (20239677)
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| Keywords | 魚類 / ヘルパーT細胞 / Th亜集団 |
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| Research Abstract |
申請者らは既にコイヘルパーT細胞（Th）の培養法を確立している．具体的には，コイの腎臓白血球を分離し，胸腺由来細胞株などの支持細胞上で培養すると，白血球の活発な増殖が観察され，これら細胞を新たな支持細胞上にまきなおし，継代することで，長期間に亘る細胞の増殖が維持できる．これら増殖した細胞の遺伝子発現を調べたところ，CD4-1・CD4-2・lck・CD3δなどの各種Th細胞関連遺伝子の発現が確認されたが，他の血球マーカー遺伝子の発現は認められなかった．また，多種類の機能的なTCR Vα・Vβ鎖遺伝子の発現は認められたが，Vγ・Vδ鎖遺伝子は“stop codon”や“frame shift”を伴う非機能的な配列がほとんどであった．これらのことは，本培養系ではCD4＋CD8-のαβT細胞，すなわちヘルパーT細胞がポリクローナルに増殖しているものと考えられた.そこで，本年度は，このコイヘルパーT細胞培養から細胞を1個づつマイクロピペットを用いて釣りだし，これら1個のTh細胞由来のクローン化T細胞株の樹立を試みた．また，コイのクローン化T細胞の培養に近縁種である，リコンビナントゼブラフィッシュIL-2(rzIL-2)を作製し，同クローン化Th細胞の培養に添加した．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
コイヘルパーT細胞亜集団を同定する目的で，コイTh細胞を1個釣りしリコンビナントIL-2存在下で培養したところ，複数のクローン化Th細胞が得られた．これらクローン化Th細胞の性状を調べたところ，PHA刺激によりIFNgやIFNg-rel遺伝子の発現が増強されるTh1様のクローンやIL4/13遺伝子発現が増強されるTh2様のクローンそして両方の性状を持つTh0様のクローンなど，魚類のTh1およびTh2の性状解析およびそれらの分化に有用なクローンが多数得られていた．
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| Strategy for Future Research Activity |
今後の研究方策としては，25年度研究で得られた，コイTh1およびTh2様クローンを用いて，サイトカイン遺伝子の発現のみならずt-bet,gata3などの転写因子の遺伝子についても，各クローンで発現の有無を調べ，魚類Th亜集団の同定を行う予定である．
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[Journal Article] Transcription analysis of two Eomesodermin genes in lymphocyte subsets of two teleost species.2014
Author(s)
Takizawa, F., Araki, K., Ohtani, M., Toda, H., Saito, Y., Lampe, V.S., Dijkstra, J.M., Ototake, M., Moritomo, T., and Nakanishi, T.
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Journal Title
Fish & shellfish immunology
Volume: 36
Pages: 215-222
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Peculiar monomeric interferon gammas, IFNγrel 1 and IFNγrel 2, in ginbuna crucian carp.2014
Author(s)
Shibasaki, Y., Yabu, T., Araki, K., Mano, N., Shiba, H., Moritomo, T., and Nakanishi, T.
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Journal Title
FEBS Journal
Volume: 281
Pages: 1046-1056
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Clonal growth of carp (< i> Cyprinus carpio</i>) T cells< i> in vitro</i>: Long-term proliferation of Th2-like cells.2013
Author(s)
Yamaguchi, T., Katakura, F., Someya, K., Dijkstra, J.M., Moritomo, T., and Nakanishi, T.
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Journal Title
Fish & shellfish immunology
Volume: 34
Pages: 433-442
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Expression profiles of interferon gamma genes in response to immunostimulants and alloantigen in ginbuna crucian carp Carassius auratus langsdorfii2013
Author(s)
Araki, K., Takizawa, F., Yamasaki, M., Esumi, M., Moritomo, T., Ototake, M., Yamamoto, A., and Nakanishi, T
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Journal Title
Fisheries science
Volume: 79
Pages: 213-220
DOI
Peer Reviewed
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