2014 Fiscal Year Annual Research Report
エピトープ情報を活用した魚卵アレルゲン検知系の開発
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24580294
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
佐伯 宏樹 北海道大学, 水産科学研究科(研究院), 教授 (90250505)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
清水 裕 北海道大学, 水産科学研究科(研究院), 技術専門職員 (00374629)
平松 尚志 北海道大学, 水産科学研究科(研究院), 准教授 (10443920)
原 彰彦 北海道大学, -, 名誉教授 (40091483)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 食物アレルギー / 魚卵 / β’-component / IgEエピトープ / 抗エピトープ抗体 / シロザケ / アサバカレイ / カペリン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【内容】 魚卵の主要アレルゲンタンパク質であるβ'-component（β'-c）のIgEエピトープと類似配列ペプチドを認識する各種抗体群を用いて，魚卵のアレルゲン性を評価できる検知系の構築をめざした。すなわち，シロザケβ'-cに存在する５種類のIgEエピトープをそれぞれ特異的に認識する5抗体（a-Ep1～a-Ep5）と，各種魚卵中のβ'-c間でアミノ酸配列の類似性が高い部位を認識する4抗体（a-Hp1～a-Hp4）を作製した。そして，これら抗体群の反応特性を，シロザケ，アサバカレイ，カペリンのβ'-c (Nβ)，これらのペプシン消化ペプチド（Pβ），およびペプシン-トリプシン消化ペプチド（PTβ）を抗原としたELISAおよびイムノブロッティングによって評価した。
【結果】（１）ELISAにおいて，３魚種全てのNβと反応するa-Ep5（認識部位：VVDWMK）を得ることができた。なお同抗体の反応強度は魚種間で差があるので，a-Ep5は定性的検知系の構築に有効であると判断した。（２）3魚類のNβをSDS処理後にイムノブロッティングに供したところ，a-Ep5に加え，a-Ep4，a-Hp1，2および4において，ELISAでは認められなかった特異反応が発現した。またシロザケの場合，PβとPTβに対する各抗体の反応性は損なわれなかった。（３）一方，アサバカレイとカペリンのPβとPTβでは，前記抗体群との特異反応性が喪失した。完全に喪失した。
【考察】 Native状態の魚卵共通アレルゲンを認識する抗体a-Ep5とSDS処理抗体を認識する抗体群を併用することによって，アレルギー患者の血清（特異抗体）を用いずにアレルゲン性を評価できると判断した。また。上記の抗体群は，加工，消化吸収過程における魚卵アレルゲンの構造変化とIgEエピトープの反応性の関係を議論できるツールとなりうる。
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