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2013 Fiscal Year Research-status Report

魚類コラーゲンの架橋形成機構の解明ー各LH分子種の水酸化作用部位と発現特性の解明

Research Project

Project/Area Number 24580306
Research InstitutionFukui Prefectural University

Principal Investigator

横山 芳博  福井県立大学, 海洋生物資源学部, 教授 (90291814)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 細井 公富  福井県立大学, 海洋生物資源学部, 講師 (70410967)
Keywordsコラーゲン / リジルヒドロキシラーゼ / 架橋
Research Abstract

魚類のコラーゲンは哺乳類のコラーゲンと比較して、酸に対する溶解性が極めて高く、化学的に不安定である。その原因の1つとして、分子間架橋の量や質が異なることが予想される。哺乳動物において、コラーゲン分子の架橋形成初期段階の反応を触媒すると考えられているリジルヒドロキシラーゼ (LH) には、3種類の分子種が確認されている。魚類のLHに関する知見はほとんどなかったが、本研究室におけるトラフグおよびコイのLH分子種発現解析の結果、LH2発現量の高低が、コラーゲンの不安定性に深く関わっている可能性が示された。魚種により、酸に対するコラーゲンの溶解性は大きく異なることから、平成24年度には、魚種の中ではコラーゲンの酸可溶性が極めて低いアナゴを用いて、LH1のクローニングを行った。平成25年度はさらに、アナゴLH2に加えて、魚類の中ではコラーゲンの酸溶解性の高いヒラメからもLHのクローニングを試みた。また、発現解析における内部標準遺伝子のEF-1αのcDNAクローニングも併せて行った。
アナゴcDNAを鋳型にLH2およびEF-1αに対する縮重プライマーから、それぞれ490bpおよび370bpのcDNA断片を得た さらにヒラメcDNAを鋳型にLH1およびEF-1α縮重プライマーから、それぞれ496bpおよび514bpのcDNA断片を得た。近隣結合法による系統樹を作製した結果、それぞれの断片配列が目的の遺伝子群より構成されるクラスター内に納まり、目的の断片が得られたことが明らかとなった。今後、さらに各LH分子種のmRNA発現量を検討するとともに、コラーゲンの酸溶解性を検討する予定である。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

リジルオキシターゼ(LH)は複数の分子種よりなるファミリー分子である。昨年度は魚類の中では最も筋肉由来コラーゲンの溶解性が最も低いものの一つであるアナゴからLH分子種のcDNAクローニングを試み、LHファミリー分子の一つであるLH1のcDNAクローニングに成功した。今年度はさらにアナゴよりLH2およびEF-1α(内部標準遺伝子)のcDNAクローニングに成功した。さらに、魚類の中ではコラーゲン酸溶解性の高いヒラメよりLH1およびEF-1αのcDNAクローニングを行った。

Strategy for Future Research Activity

平成25年度までの研究によって、魚類の中で最も筋肉由来コラーゲンの酸溶解性が低いアナゴからLH1およびLH2 cDNAのクローニングに成功した。また、魚類の中でも酸溶解性の高いヒラメよりLH1のcDNAクローニングを行った。また、発現解析における内部標準遺伝子であるEF-1αを得た。今後は、発現解析と並行して、さらに他のファミリー分子のクローニングを試みる。LH2は、コラーゲンのNまたはC末端のテロペプチド領域においてリジン残基の水酸化に関与するのではないかと予想される。一方、LH3に関してはその機能は今回目的とするコラーゲンの酸溶解性に影響する架橋形成反応とは直接関係がないことが予想される。そこで今後は、特にヒラメLH2分子のcDNAクローニングに注力する必要がある。これまでのところ、ヒラメからLH2の分子情報は得られていない。発現量の問題があるのかもしれないことから、魚類の中でも筋肉由来コラーゲンの酸溶解性が比較的高いコイについてもLHファミリー分子のcDNAクローニングを試みる。
また、遺伝子クローニングおよび発現解析と並行して、各種魚類コラーゲンの酸溶解性を測定し、架橋形成とコラーゲンの酸溶解性との関連を検討する予定である。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

コラーゲン抽出用資材の納品が間に合わなかったため。
平成26年度にコラーゲン抽出用資材を購入予定。

  • Research Products

    (3 results)

All 2013

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (1 results)

  • [Journal Article] Cloning and expression of cDNA encoding lysyl hydroxylase 1, 2 and 3 in tiger puffer Takifugu rubripes.2013

    • Author(s)
      Hiroshi Tsukamoto, Yoshihiro Yokoyama, Tohru Suzuki, Shoshi Mizuta, Reiji Yoshinaka and Yoshiaki Akahane
    • Journal Title

      Comparative Biochemistry and Physiology, Part B

      Volume: 166 Pages: 123-132

    • DOI

      10.1016/j.cbpb.2013.08.001

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Isolation of collagen from tiger pufferfish parts and its solubility in dilute acetic acid.2013

    • Author(s)
      Hiroshi Tsukamoto, Yoshihiro Yokoyama, Tohru Suzuki, Shoshi Mizuta, Reiji Yoshinaka and Yoshiaki Akahane
    • Journal Title

      Fisheries Science

      Volume: 79 Pages: 857–864

    • DOI

      10.1007/s12562-013-0650-5

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] コイおよびマアナゴ組織におけるリジルヒドロキシラーゼの発現2013

    • Author(s)
      横山芳博・山岸和希子・細井公富・水田尚志・鈴木徹
    • Organizer
      北陸合同バイオシンポジウム
    • Place of Presentation
      石川県七尾市
    • Year and Date
      20131107-20131108

URL: 

Published: 2015-05-28  

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