2014 Fiscal Year Annual Research Report
選択用薬剤に依存しない遺伝子高発現細胞取得に基づく異種移植用クローンブタの作製
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24580411
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| Research Institution | Kagoshima University |
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Principal Investigator |
佐藤 正宏 鹿児島大学, 医用ミニブタ・先端医療開発研究センター, 教授 (30287099)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
三好 和睦 鹿児島大学, 農学部, 准教授 (70363611) [Withdrawn]
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | クローンブタ / 遺伝子導入 / ＫＯ / 遺伝子改変 / 異種移植 / DAF（補体抑制因子） / thrombomodulin（血液凝固阻害因子） / α-Gal epitope |
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| Outline of Annual Research Achievements |
異種移植には超急性移植拒絶を招く特定の糖鎖α-Gal epitope(α-Gal)をブタ細胞表面から除く必要があるが、更に、急性・慢性移植拒絶を抑える幾つかの移植拒絶抑制因子を導入された、いわゆる「多遺伝子導入クローンブタ」の開発が求められる。今回、独自に考案した選択用薬剤に依存しないpiggyBac（PB）を基本とした多遺伝子導入細胞の取得法、新しい方法を用いたα-Galを完全に発現しないKOブタ細胞の作製、体細胞核移植法（SCNT）などを用いて上記目標を達成することを目指す。α-Galはα-GalTにより合成される。従って、α-Galをブタ細胞から無くすには、α-GalT遺伝子をKOするか、α-Galを消化するEndoGalCを細胞内で発現させればよい。前者は、最近開発された次世代型KO系と呼ばれるCRISPR/Cas9を用いてα-GalT遺伝子をKOしたα-Galを完全に無くしたブタ細胞株CRISPR-2-1の作製に成功した（Sato et al., 2014）。後者では、毒素結合α-Gal特異的レクチンを用いて薬剤不在下EndoGalCを導入されたブタ細胞株（α-Gal陰性）を得た（Sato et al., 2013）。更に、PBを基本とした遺伝子導入系により、α-Gal発現陰性ブタ細胞を効率良く取得できることを示した（Sato et al., 2015）。従って、in vitroでブタ細胞への異種移植に伴う様々な拒絶を抑える因子（遺伝子）を導入する系は確立したといえる。一方、上述のCRISPR-2-1をドナーとするSCNTを用いて得たクローン胚盤胞にα-Gal発現が不在なことを確認した（Sato et al., 2014）。現在、最終的に多遺伝子発現クローンブタ作製を目指し、CRISPR-2-1にDAFやTMなどの拒絶を抑える因子をPB経由で導入している。
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[Journal Article] Identification of genomic locus responsible for experimentally induced testicular teratoma 1 (ett1) on mouse Chr 182014
Author(s)
Miyazaki T, Ikeda Y, Kubo I, Suganuma S, Fujita N, Itakura M, Hayashi T, Takabayashi S, Katoh H, Ohira Y, Sato M, Noguchi M, Tokumoto T
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Journal Title
Mammalian Genome
Volume: 25
Pages: 317-326
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] Efficient generation of α-1,3-galactosyltransferase-deficient porcine embryonic fibroblasts by CRISPR/Cas9-mediated knock-in system2014
Author(s)
Sato M, Kagoshima A, Saitoh I, Inada E, Miyoshi K, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
Organizer
The Asian Federation of Laboratory Animal Science Associations (AFLAS) Congress
Place of Presentation
Loyal Chulan Hotel, Kuala Lumpur, Malaysia
Year and Date
2014-11-11 – 2014-11-12
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