2014 Fiscal Year Annual Research Report
広域分子量タンパク質群のリン酸化動態を追跡できるリン酸基親和性電気泳動ゲルの開発
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24590050
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
木下 恵美子 広島大学, 医歯薬保健学研究院(薬), 助教 (40379912)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | リン酸基親和性電気泳動 / フォスタグ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では，申請者らが開発したリン酸基親和性電気泳動法の原理を基盤として，高分子から低分子にわたる広い分子量範囲のタンパク質のリン酸化状態を，同一の電気泳動ゲルで解析できる技術の開発を行なうことを目的とした。。申請者らは、2011年にBis-Tris-HCl (pH6.8)をゲルバッファーとした「中性フォスタグSDS-PAGE」を開発し，従来のアルカリ性条件下のフォスタグSDS-PAGEよりも高い分離能でリン酸化タンパク質を解析することに成功した。しかし、３級アミンであるBis-Tris はアクリルアミドのラジカル重合反応に阻害的な反応をおこすため，高分子量タンパク質解析用の低濃度のゲルの作成が困難で、200 kDa を超える高分子タンパク質のリン酸化解析は不可能だった。
H２４年度は、Bis-Tris以外のゲルバッファーを選定し、この問題の解決を図った。その結果、Tris-HCl (pH 7.0)あるいはTris-acetate (pH7.0)をゲルバッファーとして適用することによって、Bis-Trisゲルと同等の分離能を持ちながら、低濃度ゲルを用いた高分子量タンパク質のリン酸化解析を実現した。
H２５年度はBis-Tris-HCl，Tris-HCl，Tris-acetateの３つのゲルに分離能力の差異がないか検討した。様々な細胞内タンパク質，様々な分子量範囲で検討したところ，200kDa 以下ではBis-Tris-HClが分離能に優れたが200kDa 以上ではそれのゲル化が不可能なためにTris-acetate を使用するのが良いと結論づけた。
H２６年度は，これまでに得た知見を利用して，広域分子量に渡るできるだけ多くのタンパク質についてのフォスタグ電気泳動パターンを収集，データベース化するための準備をおこない，データの蓄積に努めた。
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[Journal Article] Simple enrichment of thiol- containing biomolecules by using zinc(II)-cyclen-functionalized magnetic beads2014
Author(s)
Fujioka, H., Tsunehiro, M., Kawaguchi, M., Kuramoto, Y., Kurosaki, H., Hieda, Y., Kinoshita-Kikuta, E., Eiji Kinoshita, and Koike, T.
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Journal Title
J. Sep. Sci.
Volume: 37
Pages: 1601-1609
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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