2013 Fiscal Year Research-status Report
転写に共役したＤＮＡ傷害に起因する新規乳癌発症機構の解析
| Project/Area Number |
24590388
|
|---|
| Research Institution | Kumamoto University |
|---|
Principal Investigator |
桑原 一彦 熊本大学, 大学院生命科学研究部, 准教授 (10263469)
|
|---|
| Keywords | 非遺伝性散発性乳癌 / マウスモデル / DNA傷害 / mRNA核外輸送 |
|---|
| Research Abstract |
２）乳腺上皮細胞の増殖、分化に及ぼす「転写共役型ＤＮＡ傷害」の影響
乳腺特異的ＧＡＮＰ欠損マウスを妊娠、出産後の乳腺組織を摘出し、組織学的解析を行ったところ、細胞増殖の低下を伴う乳腺組織構築の異常を認めた。次にこの表現型がＧＡＮＰ以外のＴＲＥＸ２複合体の構成因子であるＰＣＩＤ２欠損でも認めるかを解析した。ＭＡＤ２ ｍＲＮＡの転写に関わるＰＣＩＤ２の乳腺特異的欠損マウスを作成し、妊娠、出産後の乳腺組織構築を解析した。現在、解析数が少ないが組織構築異常を認めることが示唆されている。
３）ＧＡＮＰが制御する乳癌発症に関与する分子（群）の確定
平成２４年度に解析した遺伝子の中で、複数の候補遺伝子の発現をＰＣＲで確認した。その結果、乳癌発症という観点からＢＲＣＡ２に着目した。この分子の発現はＧＡＮＰノックダウン細胞で転写レベルで減少していることが明らかになった。ＧＡＮＰによるＢＲＣＡ２の転写制御にｍＲＮＡ核外輸送が関わるかはまだ結論は出ていないので、平成２６年度に引き続き解析を行う。
４）ヒト乳癌臨床検体におけるＧＡＮＰタンパク発現低下の原因の探索
これまでに名古屋市立大学乳腺外科９２例の非遺伝性乳癌の検体を抗ＧＡＮＰ抗体による免疫染色にて解析し、悪性度の高い乳癌は正常乳腺や上皮内癌と比較してＧＡＮＰの発現が著しく低下していることを見出した。平成２５年度は熊本大学乳腺外科４５０例の検体も免疫染色で解析し、同様な結果を得た。同時にｇａｎｐ ｍＲＮＡの発現もリアルタイムＰＣＲで解析したが、ｍＲＮＡの発現は悪性度と相関しなかった。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
２）乳腺上皮細胞の増殖、分化に及ぼす「転写共役型ＤＮＡ傷害」の影響
ｐｃｉｄ２－ｆｌｏｘｅｄマウスとｗａｐ－ｃｒｅマウスとの交配がスムーズに行えず、乳腺特異的ＰＣＩＤ２欠損マウスの作成には予想外の時間を要してしまった。妊娠、出産後の乳腺組織の解析を行うことができたが、解析数が不十分であるため、引き続き解析を続ける。
３）ＧＡＮＰが制御する乳癌発症に関与する分子（群）の確定
平成２４年度に同定した複数の候補遺伝子の中で、遺伝性乳癌発症に関わるＢＲＣＡ２に特に着目した。その理由として、これまで非遺伝性散発性乳癌におけるＢＲＣＡ２の関与は議論があり、ＧＡＮＰによるＢＲＣＡ２の新しい制御機構はこの問題にアプローチするために重要な知見となる可能性があるためである。
４）ヒト乳癌臨床検体におけるＧＡＮＰタンパク発現低下の原因の探索
コホート研究の場合、複数の独立した集団を解析することにより、得られた結論をさらに強固にすることができる。交付申請書には記載していないが、平成２５年度はこれまでの名古屋市立大学乳腺外科９２例の検体に加え、熊本大学乳腺外科４５０例の検体を解析した。今回の解析からタンパク発現低下の原因として転写レベルでの制御の可能性は低く、別の原因（タンパク分解など）を考慮する必要性がある。
|
| Strategy for Future Research Activity |
３）ＧＡＮＰが制御する乳癌発症に関与する分子（群）の確定
ＧＡＮＰによるＢＲＣＡ２の制御がどのように行われているのか、その分子機構を明らかにする。ｍＲＮＡ核外輸送の可能性も否定はできないが、リアルタイムＰＣＲによる予備実験では、ｇａｎｐノックダウン細胞において核内と細胞質内の両方のｂｒｃａ２ ｍＲＮＡの発現が激減しているため、別の機構を考慮する必要がある。
４）ヒト乳癌臨床検体におけるＧＡＮＰタンパク発現低下の原因の探索
平成２５年度の解析から乳癌検体におけるＧＡＮＰの発現低下が転写レベルで制御されている可能性が低くなったため、別の原因を考える必要がある。ＧＡＮＰがユビキチン化を受けているか、などタンパク分解による制御の可能性を検討する。
平成２６年度の研究費の総額は１００万円で、その内訳として物品費６０万円、旅費３０万円、その他１０万円を予定している。物品費としては、培養用プラスチック製品（フラスコ、遠心用チューブ、培養用ディッシュなど）、分子生物学的実験のための（ＰＣＲ用試薬、ライゲーションキットなど）に６０万円を充てる予定である。また遺伝子改変マウスの飼育費にも１０万円を使用する予定である。得られた成果発表の場として、日本がん分子標的治療学会（仙台）、日本癌学会（横浜）、日本免疫学会（京都）での発表を予定しており、旅費はそれらの参加費用に充てる。
|
| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
平成２５年度に「ヒト乳癌臨床検体におけるＧＡＮＰタンパク発現低下の原因の探索」を行うために検体におけるｇａｎｐ ｍＲＮＡの発現を解析したが、ｍＲＮＡの発現と乳癌の悪性度は逆相関しなかった。そのため当初予定していたプロモーターのメチル化の解析を行う必要性がなくなり、この実験に使用する試薬を購入しなかった。
平成２５年度に生じた当該助成額は、平成２６年においてＧＡＮＰのタンパク分解の機構を解析するための実験に使用する予定である。
|
-
[Journal Article] Histopathological evaluation of the diversity of cells susceptible to H5N1 virulent avian influenza virus.2014
Author(s)
Haru Ogiwara, Fumihiko Yasui, Keisuke Munekata, Asako Takagi-Kamiya, Tsubasa Munekata, Namiko Nomura, Futoshi Shibasaki, Kazuhiko Kuwahara, Nobuo Sakaguchi, Yoshihiro Sakoda, Hiroshi Kida, Michinori Kohara
-
Journal Title
American Journal of Pathology
Volume: 184
Pages: 171-183
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] Pcid2 inactivates developmental genes in human and mouse embryonic stem cells to sustain their pluripotency by modulation of Eid1 stability.2014
Author(s)
Buqing Ye, Zhonghua Dai, Benyu Liu, Rui Wang, Chong Li, Guanling Huang, Shuo Wang, Pengyan Xia, Xuan Yang, Kazuhiko Kuwahara, Nobuo Sakaguchi, Zusen Fan
-
Journal Title
Stem Cells
Volume: 32
Pages: 623-635
DOI
Peer Reviewed
-
-
[Journal Article] Anti-tumor impact of p14ARF on gefitinib-resistant non-small cell lung cancers.2013
Author(s)
Ken Saito, Nagio Takigawa, Naoko Ohtani, Hidekazu Iioka, Yuki Tomita, Ryuzo Ueda, Junya Fukuoka, Kazuhiko Kuwahara, Eiki Ichihara, Katsuyuki Kiura, Eisaku Kondo
-
Journal Title
Molecular Cancer Therapeutics
Volume: 12
Pages: 1-13
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] CA-S27: A novel Lewis A associated carbohydrate epitope is diagnostic and prognostic for cholangiocarcinoma.2013
Author(s)
Atit Silsirivanit, Norie Araki, Chaisiri Wongkham, Kulthida Vaeteewoottacharn, Chawalit Pairojkul, Kazuhiko Kuwahara, Yoshiki Narimatsu, Hiromichi Sawaki, Hisashi Narimatsu, Seiji Okada, Nobuo Sakaguchi, Sopit Wongkham
-
Journal Title
Cancer Science
Volume: 108
Pages: 1278-1284
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] Broad-spectrum detection of H5 subtype influenza A viruses with a new fluorescent immunochromatography system.2013
Author(s)
Akira Sakurai, Katsuyoshi Takayama, Namiko Nomura, Tsubasa Munakata, Naoki Yamamoto, Tsuruki Tamura, Jitsuho Yamada, Masako Hashimoto, Kazuhiko Kuwahara, Yoshihiro Sakoda, Yoshihiko Suda, Yukuharu Kobayashi, Nobuo Sakaguchi, Hiroshi Kida, Michinori Kohara, Futoshi Shibasaki
-
Journal Title
PLOS One
Volume: 8
Pages: e76753
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] Breast cancers with high DSS1 expression that potentially maintains BRCA2 stability show poor prognosis in the relapse-free survival.2013
Author(s)
Andri Rezano, Kazuhiko Kuwahara, Mutsuko Yamamoto-Ibusuki, Masahiro Kitabatake, Penpak Moolthiya, Suchada Phimsen, Taiji Suda, Shigenobu Tone, Yutaka Yamamoto, Hirotaka Iwase, Nobuo Sakaguchi
-
Journal Title
BMC Cancer
Volume: 13
Pages: 562
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
-
-
