乳癌におけるミトコンドリアＤＮＡ―Ｄループ領域変異解析を用いた癌細胞系譜の解明

2014 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 24590433
• Research Institution: Nihon University
• Principal Investigator: 増田 しのぶ 日本大学, 医学部, 教授 (20276794)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: 乳癌 / ミトコンドリアDNA / クロナリティ / 癌細胞系譜

Outline of Annual Research Achievements

本研究は、最終的に乳癌の発生進展過程の解明および治療の適正化に貢献することを目標としている。平成26年度は、遺伝子変異多様性の可視化のために、以下の基礎的検討を行った。
目的：同一細胞における蛋白と遺伝子を同時に可視化するためのプロトコールを確立する。
材料：ヒト乳がん培養細胞株(SK-BR3)を用いたセルブロックのパラフィン包埋切片を用いた。方法：①蛋白の検出には抗HER2抗体を用いた免疫染色を、遺伝子の検出にはHER2 gene probe, CEP17 probeを用いたin situ hybridization法を行った。標識物質は、IHC法にはAlexa Fluor 555を、ISH法にはTexas red (HER2)およびFITC (CEN-17)の蛍光色素を用いた。②IHC法のみ、IHC法後ISH法、ISH法のみの検討を行い、IHC法後ISH法のシグナルの適正性を確認した。③IHC法については、ポリマー標識法とLSAB法とを比較検討した。④ISH法の前処置として酵素処理の必要性の有無について比較検討した。
結果：①蛍光標識によるIHC法後ISH法により、蛋白と遺伝子の同時検出は可能であった。②IHC法については、ポリマー標識法のほうがLSAB法よりも良好なシグナルが得られた。③ISH法の前処置として酵素処理は不要であり、この過程を省略することにより良好なシグラルが得られた。
考察：同一細胞における蛋白と遺伝子を同時に可視化するためのプロトコールが確立されたことで、腫瘍内多様性をより正確かつ詳細に理解することが可能となった。

Research Products

• [Journal Article] Histopathological characteristics of breast ductal carcinoma in situ and association with imaging findings. (2015)
  • Author(s): Tang X, Yamashita T, Hara M, Kumaki N, Tokuda Y, Masuda S.
  • Journal Title: Breast Cancer Volume: 印刷中 Pages: 印刷中
  • DOI: DOI 10.1007/s12282-015-0592-0, 2014
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Pathological examination of breast cancer biomarkers: current status in Japan. (2015)
  • Author(s): Masuda S
  • Journal Title: Breast Cancer Volume: 印刷中 Pages: 印刷中
  • DOI: DOI 10.1007/s12282-014-0566-7, 2014.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Altered intracellular region of MUC1 and disrupted correlation of polarity-related molecules in breast cancer subtypes. (2015)
  • Author(s): Iizuka M, Nakanishi Y, Fuchinoue F, Maeda T, Murakami E, Obana Y, Enomoto K, Tani M, Sakurai K, Amano S, Masuda S.
  • Journal Title: Cancer Science Volume: 106 Pages: 307-314
  • DOI: doi:10.1111/cas.12596, 2015.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Overexpression of PGC1α and accumulation of p62 in apocrine carcinoma of the breast. (2015)
  • Author(s): Fuchinoue F, Hirotani Y, Nakanishi Y, Yamaguchi H, Nishimaki H, Noda H, Tang X, Iiuzuka M, Amano S, Sugitani M, Nemoto N, Masuda S.
  • Journal Title: Patholology International Volume: 65 Pages: 19-26
  • DOI: doi:10.1111/pin.12235, 2014.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Comparative Study of the One-step Nucleic Acid Amplification Assay and Conventional Histlogical Examination for the Detection of Breast Cancer Sentinel Lymph Node Metastases. (2014)
  • Author(s): Terada M, Niikura N, Tsuda B, Masuda S, Kumaki N, Tang X, Okamura T, Saito Y, Suzuki Y, Tokuda Y.
  • Journal Title: Tokai Exp Clin Med Volume: 39 Pages: 122-127
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The cell cycle profiling: Risk score based on CDK1 and 2 predicts early recurrence in node-negative, hormone receptor-positive breast cancer treated with endocrine therapy. (2014)
  • Author(s): Kim SJ, Masuda N, Tsukamoto F, Inaji H, Akiyama F, Sonoo H, Kurebayashi J, Yoshidome K, Tsujimoto M, Takei H, Masuda S, Nakamura S, Noguchi S.
  • Journal Title: Cancer Letters Volume: 355 Pages: 217-223
  • DOI: doi: 10.1016/j.canlet. 2014.08.042, 2014.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Interpretation of HER2 tests in gastric cancer: confirmation of interobserver differences and validation of a QA/QC educational program. (2014)
  • Author(s): Kushima R, Kuwata T, Yao T, Kuriki H, Hashizume K, Masuda S, Tuda H, Ochiai A.
  • Journal Title: Virchows Arch Volume: 464 Pages: 539-545
  • DOI: DOI 10.1007/s00428-014-1567-9,2014.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Prognostic Significance of the Ki67 Scoring Categories in Breast Cancer Subgroups. (2014)
  • Author(s): Niikura N, Masuda S, Kumaki N, Tang X, Terada M, Terao M, Iwamoto T, Oshitanai R, Morioka T, Tuda B, Okamura T, Saito Y, Suzuki Y, Tokuda Y.
  • Journal Title: Clinical Breast Cancer Volume: 14 Pages: 323-329
  • DOI: doi: 10.1016/j.clbc.2013.12.013.
  • Peer Reviewed