2014 Fiscal Year Annual Research Report
ゴルジ・小胞体ストレス応答によりもたらされる癌幹細胞自己複製機構の解明
| Project/Area Number |
24590472
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| Research Institution | Akita University |
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Principal Investigator |
大森 泰文 秋田大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (90323138)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉岡 年明 秋田大学, 医学部, 講師 (80302264)
山本 洋平 秋田大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (70400512)
榎本 克彦 秋田大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20151988) [Withdrawn]
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | コネキシン / 癌幹細胞 / 小胞体ストレス / ゴルジ体ストレス / ATF6α / 癌進展 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
コネキシン32(Cx32)のゴルジ体内貯留によるATF6α活性化に伴う下流遺伝子の発現解析： 培養液からdoxycycline(Dox)を除くことで外来性のCx32を過剰発現させることのできるHuH7 Tet-off Cx32細胞を用いて、Cx32のゴルジ体内貯留を誘導しATF6αを活性化させた際に、転写因子ATF6αにより転写される下流遺伝子の発現量の変化を定量的RT-PCRで調べた。GRP78やCalnexinといった小胞体ストレスを解除する適応応答関連タンパクのmRNAが著明に増加したのに対し、GADD153などの小胞体ストレス時にアポトーシスを誘導する破壊的応答関連タンパクのmRNAは変化がなかった。また、これらのmRNAの発現変化はATF6αに対するsiRNAを導入すると認められなくなったことから、ATF6αの活性化は適応応答を惹起することが明らかとなった。
Cx32とATF6αとの複合体形成の検討： Cx32とATF6αがゴルジ体で複合体を形成していることを確認するために、Cx32の過剰発現時に抗Cx32抗体を用いて免疫沈降を行い、ATF6αの共沈を検討したが、Cx32とATF6αの直接的な複合体形成は確認できなかった。
活性化型ATF6α過剰発現細胞の作製と癌幹細胞(CSC)数の変化および造腫瘍能の検討： HuH7細胞に、活性化型ATF6αのcDNAをレトロウイルスベクターを用いて導入し、活性化型ATF6α過剰発現株を作製した。これらの細胞におけるCSCの増減を、FACSでside population(SP)画分を解析したところ、ATF6α過剰発現株ではSPが増加していた。したがって、ATF6αはCSCの自己複製を亢進することが分かった。また、SCIDマウス皮下への異種移植により造腫瘍能を検討したところ、ATF6α過剰発現株はより高い造腫瘍能を示した。
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[Journal Article] Dysfunction in gap junction intercellular communication induces aberrant behavior of the inner cell mass and frequent collapses of expanded blastocysts in mouse embyos.2015
Author(s)
Togashi K, Kumagai J, Sato E, Shirasawa H, Shimoda Y, Makino K, Sato W, Kumazawa Y, Omori Y, Terada, Y.
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Journal Title
J. Assist. Reprod. Genet.
Volume: 32
Pages: 印刷中
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Rapid immunohisto-chemistry based on alternating current electric field for intraoperative diagnosis of brain tumors.2015
Author(s)
Tanino M, Sasajima T, Nanjo H, Akesaka S, Kagaya M, Kimura T, Ishida Y, Oda M, Takahashi M, Sugawara T, Yoshioka T, et al.
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Journal Title
Brain Tumor Pathol.
Volume: 32
Pages: 12-19
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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