2014 Fiscal Year Annual Research Report
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24590588
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| Research Institution | Kitasato University |
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Principal Investigator |
片桐 晃子 北里大学, 理学部, 教授 (00322157)
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2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 接着カスケード / インテグリン / 遊走 / Rab13 / Rap1 / Mst1 / 細胞極性 / ケモカイン |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1)Mst1の下流で細胞骨格系タンパク質VASPがリン酸化されることで、アクチンの伸展が生じ、LFA-1が前方へ極性輸送されることがわかった。また、VASPを直接リン酸化する酵素として、Lats1/2を同定した。すなわち、ケモカイン刺激によってMst1/2が活性化されると、Lats1/2をリン酸化する。これにより活性化されたLats1/2がVASPをリン酸化することが明らかとなった。
2) Rab13ノックアウトマウスとOT-II TCR Tgマウスを掛け合わせて作製したマウス由来のprimary Tリンパ球を、骨髄細胞からGM-CSFを用いて作成した樹状細胞を抗原提示細胞として用いて、OVA存在下で刺激したところ、LFA-1依存性の免疫シナプス形成は低下し、増殖及びサイトカイン産生が低下することが判明した。
3)細胞内におけるRap1活性化の過程を、RALGDS-RBD-GFPを用いて解析したところ、ケモカイン刺激によって、Rap1は数秒以内に細胞膜で活性化され、続いてゴルジ周辺、分単位で最終的に極性形成した前方膜に活性化が限局することが判明した。これをFRETによって観察するため、YFPにRap1を、RAPL-RBDにmTurquoiseの付加し、様々な長さのリンカーでつないで、FRET効率を検討し、ケモカイン刺激依存性に活性化を観察できるシステムを開発した。
4)FilaminがLFA-1活性化を阻害しており、Rap1－GTPがその抑制を解除することを報告してきた。Filaminaのノックアウトマウスを用いて、primaryT細胞において、血管内皮細胞上でのslow rolling及びarrestが亢進し、結果として末梢リンパ節へのホーミングも上昇していることが明らかとなった。
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