2012 Fiscal Year Research-status Report
膜内蛋白分解酵素により誘導されるＴＮＦの新しい機能の解明と炎症性疾患制御への応用
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24591465
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
塚本 浩 九州大学, 大学病院, 助教 (70304772)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
堀内 孝彦 九州大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (90219212)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | TNF / 膜内蛋白分解酵素 / 関節リウマチ / 細胞内ドメイン / SPPL |
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| Research Abstract |
本研究ではTNF由来の細胞内ドメイン(TNF-ICD)が核に移行後、TNFの新しい機能を発揮する可能性に着目し、ICD形成後の遺伝子発現変化を解析する事により、TNF-ICDの機能の同定を行う事が目的である。
＜変異SPPLの作成とSPPLによるTNFの切断後に生じるICDの確認＞1)変異SPPL2aの作成: SPPLはGXGDモチーフのアスパラギン酸(D)を変異させると酵素活性が消失することがわかっているため、Inverse PCR法を用いてSPPL2acDNAに酵素活性部位変異を導入した(GXGD→GXGA, 変異SPPL2a)。2)T細胞株におけるSPPL2aによるICD形成の確認:TNFを恒常的に産生するT細胞株(Jurkat)にベクターのみ、野生型SPPL2acDNA、変異SPPL2acDNAを発現ベクターを用いて遺伝子導入した。ウエスタンブロッティングにより野生型SPPL2acDNAを遺伝子導入した場合のみ細胞内にICDが出現する事を確認した。
＜TNFファミリー分子におけるSPP、SPPLの新しい基質の探索＞膜内蛋白分解酵素のうち、その構造よりSPP, SPPLはII型膜蛋白を分解すると予想される。 TNFファミリー分子の多くはII型膜蛋白であるが、このうちSPP、SPPLの基質としてTNFとFasリガンドのみが報告されている(NatRev Mol Cell Biol 5: 499-504, 2004)。上記2分子以外の基質を見いだすため、本年度はTNFファミリー分子cDNA及びSPPcDNAまたはSPPLcDNAを発現ベクターに組み込んだ。TNFファミリー分子の候補はBAFF, APRIL, TRAIL, CD40リガンド等である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究ではTNF由来の細胞内ドメイン(TNF-ICD)が核に移行後、TNFの新しい機能を発揮する可能性に着目し、ICD形成後の遺伝子発現変化を解析する事により、TNF-ICDの機能の同定を行う事が目的である。
本年度の実績により、野生型SPPL2acDNAを遺伝子導入した場合にのみ細胞内にICDが出現する事が明らかになったため、野生型及び変異SPPL2acDNAを遺伝子導入後、細胞の遺伝子発現を比較することにより、ICD形成後の遺伝子発現変化を解析する事が可能となった。またTNFファミリー分子cDNA及びSPPcDNAまたはSPPLcDNAを発現ベクターに組み込んだことにより、今後TNFファミリー分子におけるSPP、SPPLの新しい基質の探索を行う事が可能になった。
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| Strategy for Future Research Activity |
T細胞株におけるICDにより誘導される遺伝子の探索: TNFを恒常的に産生するT細胞株に野生型SPPL2acDNA、変異SPPL2acDNAを遺伝子導入し、RNAを調製後、マイクロアレイを用いて両者の遺伝子発現を比較する。発現量に差が認められた遺伝子については半定量的PCR、およびウエスタンブロッティングにてmRNAレベル、蛋白レベルにおける発現量の確認を行う。
TNFファミリー分子におけるSPP、SPPLの新しい基質の探索：SPP、SPPLの新しい基質を見いだすため、293T細胞株にTNFファミリー分子cDNA及びSPPcDNAまたはSPPLcDNAを同時に遺伝子導入後、ウエスタンブロッティングにてICD出現の有無を確認する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
該当無し
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[Journal Article] Serum progranulin levels are elevated in patients with systemic lupus erythematosus, reflecting disease activity2012
Author(s)
Tanaka, A. Tsukamoto, H. Mitoma, H. Kiyohara, C. Ueda, N. Ayano, M. Ohta, S. I. Inoue, Y. Arinobu, Y. Niiro, H. Horiuchi, T. Akashi, K.
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Journal Title
Arthritis Res Ther
Volume: 14
Pages: R244
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] CIN85 is required for Cbl-mediated regulation of antigen receptor signaling in human B cells2012
Author(s)
Niiro, H. Jabbarzadeh-Tabrizi, S. Kikushige, Y. Shima, T. Noda, K. Ota, S. Tsuzuki, H. Inoue, Y. Arinobu, Y. Iwasaki, H. Shimoda, S. Baba, E. Tsukamoto, H. Horiuchi, T. Akashi, K.
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Journal Title
Blood
Volume: 119
Pages: 2263-73
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Hereditary Angioedema in Japan: Genetic Analysis of 13 Unrelated Cases2012
Author(s)
Yamamoto, T. Horiuchi, T. Miyahara, H. Yoshizawa, S. Inagaki, N. Umegaki, N. Kasamatsu, Y. Hara, A. Arinobu, Y. Inoue, Y. Niiro, H. Tsukamoto, H. Akashi, K.
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Journal Title
Am J Med Sci
Volume: 343
Pages: 210-214
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Long-term follow-up of autologous hematopoietic stem cell transplantation for severe systemic sclerosis2012
Author(s)
Hiroshi Tsukamoto, Takahiko Horiuchi, Toshihiro Miyamoto, Hiroaki Niiro, Yojiro Arinobu, Yasushi Inoue, Masahiro Ayano, Atsushi Tanaka, Naoyasu Ueda, Mine Harada1, Koichi Akashi
Organizer
Annual European Congress of Rheumatology 2012
Place of Presentation
Berlin, Germany
Year and Date
20120606-20120609
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