2013 Fiscal Year Research-status Report
膜内蛋白分解酵素により誘導されるＴＮＦの新しい機能の解明と炎症性疾患制御への応用
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24591465
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
塚本 浩 九州大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (70304772)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
堀内 孝彦 九州大学, 大学病院, 教授 (90219212)
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| Keywords | TNF / 膜内蛋白分解酵素 / 関節リウマチ / 細胞内ドメイン / SPPL / TACE |
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| Research Abstract |
本研究ではTNF由来の細胞内ドメイン(TNF-ICD)が核に移行後、TNFの新しい機能を発揮する可能性に着目し、ICD形成後の遺伝子発現変化を解析することにより、TNF-ICDの機能の同定を行う事が目的である。
＜変異SPPLの作成とSPPLによるTNFの切断後に生じるICDの確認＞1)変異SPPLの作成：膜内蛋白分解酵素であるSPPLはGXGDモチーフのアスパラギン酸(D)を変異させると酵素活性が消失することがわかっているため、Inverse PCR法を用いてSPPL2a、SPPL2b、SPPL2c及びSPPL3cDNAに酵素活性部位変異を導入した(GXGD→GXGA、変異SPPL)。2)T細胞株におけるSPPLによるICD形成の検討：TNFを恒常的に産生するT細胞株(Jurkat)にベクターのみ、野生型SPPL2a、SPPL2b、SPPL2c、SPPL3cDNAおよびそれぞれの変異SPPLcDNAを発現ベクターを用いて遺伝子導入した。細胞溶解後、ウエスタンブロッティングによりTNFのフラグメントを検出したところ、野生型SPPL2aを遺伝子導入した場合のみ細胞内にICDが出現した。一方、野生型SPPL2c、SPPL3cDNAを遺伝子導入した際には、TNFがTNF変換酵素(TACE)様の切断を受ける事が明らかになった。
＜TNFファミリー分子におけるSPP、SPPLの新しい基質の探索＞
膜内蛋白分解酵素のうち、その構造よりSPP、SPPLはII型膜蛋白を分解すると予想される。TNFファミリー分子はほとんどがII型膜蛋白であるが、このうちSPP、SPPLの基質としてTNFとFasリガンドのみが報告されている。上記2分子以外の基質を新たに同定するため、BAFF、APRIL、TRAIL、CD40リガンドcDNAを発現ベクターに組換えた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度までの実績により膜内蛋白分解酵素SPPLの中でSPPL2aのみがICD形成作用を有する事が明らかになった。さらに、SPPL2c、SPPL3がTACE様の酵素活性を有することが初めて明らかになった。
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| Strategy for Future Research Activity |
SPPL2c、SPPL3のTACE様作用についての解析:今回初めて明らかになったSPPL2c、SPPL3のTACE様作用につきさらに詳細な検討を行う。具体的には1)SPPLcDNAを遺伝子導入した細胞株培養上清中の可溶型TNFの濃度を比較する、2)TACE阻害薬による阻害を受けるか否か、等につき検討する。
TNFファミリー分子におけるSPP、SPPLの新しい基質の探索：SPP、SPPLの新しい基質を見いだすため、293T細胞株にBAFF、APRIL、TRAIL、CD40リガンドcDNA及びSPPcDNAまたはSPPLcDNAを同時に遺伝子導入後、ウエスタンブロッティングにてICD出現の有無を確認する。
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Research Products
(9 results)
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[Journal Article] The Cytotoxic Effects of Certolizumab Pegol and Golimumab Mediated by Transmembrane Tumor Necrosis Factor alpha.2013
Author(s)
Ueda N, Tsukamoto H, Mitoma H, Ayano M, Tanaka A, Ohta S, Inoue Y, Arinobu Y, Niiro H, Akashi K, Horiuchi T
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Journal Title
Inflamm Bowel Dis
Volume: 19
Pages: 1224-31
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Prevalence and risk factors of vertebral fracture in female Japanese patients with systemic lupus erythematosus.2013
Author(s)
Furukawa M, Kiyohara C, Horiuchi T, Tsukamoto H, Mitoma H, Kimoto Y, Uchino A, Nakagawa M, Oryoji K, Shimoda T, Harada M, Akashi K
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Journal Title
Mod Rheumatol
Volume: 23
Pages: 765-73
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Seven-year follow-up of autologous hematopoietic stem cell transplantation for severe systemic sclerosis2013
Author(s)
Tsukamoto H, Horiuchi H, Miyamoto T, Niiro H, Arinobu Y, Akahosh Mi, Masahiro Ayano, Atsushi Tanaka, Naoyasu Ueda, Koichi Akashi
Organizer
Annual European Congress of Rheumatology 2013
Place of Presentation
Madrid, Spain
Year and Date
20130612-20130615
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