2014 Fiscal Year Annual Research Report
膜内蛋白分解酵素により誘導されるＴＮＦの新しい機能の解明と炎症性疾患制御への応用
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24591465
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
塚本 浩 九州大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (70304772)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
堀内 孝彦 九州大学, 大学病院, 教授 (90219212)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 膜内蛋白分解酵素 / TNF / TNF変換酵素 / 細胞内ドメイン / SPPL / 関節リウマチ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究ではTNF由来の細胞内ドメイン(TNF-ICD)が核に移行後、TNFの新しい機能を発揮する可能性に着目し、TNFに対する膜内蛋白分解酵素の作用を明らかにする事が目的である。
1)変異SPPLの作成：膜内蛋白分解酵素であるSPPLはGXGDモチーフのアスパラギン酸(D)を変異させると酵素活性が消失することがわかっているため、Inverse PCR法を用いてSPPL2a、SPPL2b、SPPL2c及びSPPL3cDNAに酵素活性部位変異を導入した(GXGD→GXGA、変異SPPL)。
2)細胞株におけるSPPLによるICD形成の検討：TNFを恒常的に産生する細胞株(293T)にベクターのみ、野生型SPPL2a、SPPL2b、SPPL2c、SPPL3cDNAおよびそれぞれの変異SPPLcDNAを発現ベクターを用いて遺伝子導入した。細胞溶解後、ウエスタンブロッティングによりTNFのフラグメントを検出したところ、野生型SPPL2aを遺伝子導入した場合のみ細胞内にICDが出現した。
3)SPPL3のTACE様活性の同定:TNFを恒常的に産生する細胞株(293T)に野生型SPPL3cDNAを遺伝子導入した際には、TNFがTNF変換酵素(TACE)様の切断を受ける事を上記ウエスタンブロッティングにて見いだした。次にSPPL3cDNAを遺伝子導入した細胞株培養上清中の可溶型TNF濃度を測定した所、野生型SPPL3cDNAを遺伝子導入した際には、ベクターのみや変異SPPL3cDNAを遺伝子導入した場合に比較し、TNF濃度は上昇していた。TACE阻害薬を添加すると、野生型SPPL3cDNAを遺伝子導入した際のTNF濃度の上昇は抑制された。以上の結果により、SPPL3がTACE様酵素活性を有する事が初めて明らかになった。
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Research Products
(8 results)
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[Journal Article] Serum progranulin levels are elevated in dermatomyositis patients with acute interstitial lung disease, predicting prognosis.2015
Author(s)
Tanaka A, Tsukamoto H, Mitoma H, Kiyohara C, Ueda N, Ayano M, Ohta S, Kimoto Y, Akahoshi M, Arinobu Y, Niiro H, Tada Y, Horiuchi T and Akashi K.
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Journal Title
Arthritis research & therapy
Volume: 17
Pages: 27
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Longterm Safety and Efficacy of Subcutaneous Tocilizumab Monotherapy: Results from the 2-year Open-label Extension of the MUSASHI Study.2015
Author(s)
Ogata A, Amano K, Dobashi H, Inoo M, Ishii T, Kasama T, Kawai S, Kawakami A, Koike T, Miyahara H, Miyamoto T, Munakata Y, Murasawa A, Nishimoto N, Ogawa N, Ojima T, Sano H, Shi K, Shono E, Suematsu E, Takahashi H, Tanaka Y, Tsukamoto H, Nomura A and Investigators MS.
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Journal Title
The Journal of rheumatology
Volume: 42
Pages: 799-809
DOI
Peer Reviewed
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