エリスロポエチンによる虚血障害脊髄組織の再生

2014 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 24592058
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 平野 弘嗣 三重大学, 医学部附属病院, 診療等従事者 (40378394)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 新保 秀人 三重大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (70179076)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: 脊髄虚血 / エリスロポエチン / 血管再生 / 神経再生

Outline of Annual Research Achievements

1.マウス脊髄虚血モデルの作成について：adult male C57BL/6マウスを使用し、静脈麻酔を施し気管内挿管、仰臥位で左第二肋間を切開し、下行大動脈を露出、左鎖骨下動脈分岐すぐの下行大動脈を脳外科用血管クリップにて9分間遮断、対麻痺を発症することが確認できた。また同様に7分間遮断でも対麻痺を発症することを確認した。
2.実験グループの設定：Erythropoietin投与群（5000単位のrecombinant human EPOを虚血30分前と術後7日間毎日経静脈投与）とコントロール群（同容積の生理食塩水を同じタイミングで経静脈投与）を設定した。
3.脊髄虚血作成後のマウスの経過観察について：両群を術後58日間にわたり観察し、生存率、後肢の運動機能、脊髄の組織所見を比較する予定であるが、二週間程度で死亡するマウスが多く、長期生存のマウスの個体数は少ないが、７日後までの運動機能評価は行えている。
4.組織学的な脊髄障害の評価について：術後7日後の組織評価については脊髄のパラフィン標本を作製し、運動神経細胞数の数のカウント、免疫染色による評価（CD34陽性細胞評価、brain-derived neurotrophic factor (BDNF)とVEGFの発現の度合い）が行えている。
5.血管再生と運動神経再生の評価について：術後28日目と56日目の組織切片にてCD31陽性細胞とNeuN陽性細胞を免疫染色にて同定することにより評価する予定であるが、いまだ十分な検体数が得られておらず、両群間の比較ができていない。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

脊髄虚血マウスの生存率が低く、長期生存のマウスの検体が少ないため。

Strategy for Future Research Activity

1.マウス脊髄虚血モデルの作成について：脊髄虚血時間を7分に短縮し、対麻痺の重症度を下げたところ生存率が向上したため、この設定で以後の研究を継続する。
2.実験グループの設定について：上記設定にて28日生存の検体数を増やし、EPO群とコントロール群で運動評価、組織評価について比較検討する。
3.最終目標について：28日後の評価が可能となれば、さらに56日後の評価も同様に行い、結論をまとめる。

Causes of Carryover

マウスの長期生存が得られず、その後の研究の遂行が遅れたため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

マウスの術後生存数が増えてきているため、術後の運動機能評価、組織学的評価を順次行っていき、動物、消耗品、免疫染色の抗体などの購入量を増やしていく。