2012 Fiscal Year Research-status Report
Ｈｅｄｇｅｈｏｇ関連遺伝子制御による横紋筋肉腫の治療研究
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24592238
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Kagoshima University |
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Principal Investigator |
川畑 直也 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助教 (60626836)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小宮 節郎 鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (30178371)
瀬戸口 啓夫 鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, その他 (40423727)
永野 聡 鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (50373139)
あべ松 昌彦 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, その他 (70448190)
田邊 史 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助教 (90619199)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 横紋筋肉腫 / Hedgehog / Notch / RBPJ |
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| Research Abstract |
Hedgehog シグナルやNotchシグナルは、種々の細胞の発生・分化・増殖など細胞の運命決定に重要な役割を果たしているが、近年の研究から、ヒトの一部の悪性腫瘍とも関連していることが報告されている。横紋筋肉腫において、Notchシグナル下流の転写因子であるRBPJの機能解析を行った。【方法・結果】1. 定量的PCR法により、ヒト横紋筋肉腫細胞株及び臨床検体において、Notchレセプターやリガンド、ターゲット遺伝子、転写因子RBPJの発現上昇を認めた。 2. 横紋筋肉腫細胞株をNotchシグナル阻害剤で処理すると、MTT assayの結果から、GSI Xを投与した横紋筋肉種細胞株では増殖が抑制された。 3. siRNAを用いてRBPJの発現を抑制しcolony formation assayを行ったところ、colony形成が低下し横紋筋肉腫細胞株の増殖が抑制された。4. RBPJを過剰発現させた横紋筋肉腫細胞株では、増殖が亢進した。5. RBPJ shRNAを遺伝子導入した横紋筋肉腫細胞株をヌードマウスに移植すると、有意な腫瘍増殖速度の低下を認め、生存期間も延長した。さらに、Ki67の免疫組織化学染色を行ったところ、RBPJ shRNA/RD群では、コントロール群と比較してKi67陽性細胞数の有意な減少を認めた。また、定量的PCR法を用いた細胞周期関連遺伝子の解析からも、RBPJ shRNA/RD-xenograftでは細胞周期の正の制御因子の発現低下と負の制御因子の発現上昇が見られ、横紋筋肉腫細胞株がG1 arrestを起こしていた。【考察】横紋筋肉種細胞株においてRBPJの機能を制御すると、腫瘍増殖が抑制できることをin vitro、in vivoにおいて明らかとした。本研究は、RBPJの制御が横紋筋肉腫の新たな治療ターゲットとなり得ることを示唆している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
横紋筋肉腫細胞で胎生期に重要なシグナルであるNotchシグナルを抑制することで横紋筋肉腫の増殖をin vitro, in vivoで抑制することを明らかとした。横紋筋肉腫の増殖メカニズムの一端を明らかとし、新たな分子標的治療のターゲットを見出した。
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| Strategy for Future Research Activity |
Hedgehogシグナル、Notchシグナルの低分子化合物による阻害で横紋筋肉腫の増殖・転移抑制研究を行う。またウイルスベクターを用いた横紋筋肉腫増殖抑制の研究にも着手予定。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
実験試薬（RNAi,transfection試薬、培養培地関係）
動物の購入と飼育
に使用予定
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[Journal Article] RBPJ is a novel target for rhabdomyosarcoma therapy.2012
Author(s)
Nagao H, Setoguchi T, Kitamoto S, Ishidou Y, Nagano S, Yokouchi M, Abematsu M, Kawabata N, Maeda S, Yonezawa S, Komiya S.
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Journal Title
PLoS ONE
Volume: 7
Pages: e39268
DOI
Peer Reviewed
