2013 Fiscal Year Research-status Report

Ｈｅｄｇｅｈｏｇ関連遺伝子制御による横紋筋肉腫の治療研究

Research Project

Project/Area Number	24592238
Research Institution	Kagoshima University
Principal Investigator	川畑直也鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 研究員 (60626836)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	小宮節郎鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (30178371) 瀬戸口啓夫鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (40423727) 永野聡鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 講師 (50373139) あべ松昌彦鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, その他 (70448190) 田邊史鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (90619199)
Keywords	Hedgehog / 骨軟部肉腫 / 転移 / 横紋筋肉腫
Research Abstract	すでにマイクロアレイにて同定してある、SMO,GLIをノックダウンしたときに発現・活性が変化する遺伝子の発現がreal-time PCR, western blotにてヒト骨肉腫と横紋筋肉腫細胞株で発現が正常細胞と比較して上昇していることを見出した。上記で確認した候補因子をsiRNAでノックダウンするとin vitroにおいて骨軟部肉腫細胞の浸潤能が低下することが示された。上記で確認した候補因子を expression vectorを用いて骨軟部肉腫の起源細胞の有力な候補である間葉系幹細胞に強制発現させて colony formation assay, Wound healing assay, membrane assayを使用して評価したところ、間葉系幹細胞の浸潤能が亢進することが示された。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason Plos Oneに第一報、第二報を報告できたこと。J Transl Medに第三報を掲載できたことより順調であると判断します。またSMOやGLIにより、発現や活性が制御される因子の抑制による骨軟部肉腫浸潤能への影響の解析が当初の計画通りに実行できている。
Strategy for Future Research Activity	Hedgehogの下流で骨軟部肉腫の移動・浸潤・転移に関与している因子の機能を詳細に検討する。具体的には候補因子ををshRNAでノックダウンさせてヌードマウスの膝に移植して肺転移能をin vivo imagingを用いて評価する。その後形成された腫瘍を免疫染色やRT-PCRで検討して、細胞浸潤関連遺伝子の発現を評価する。また骨軟部肉腫の患者組織における候補因子の発現を検討して予後との関連しているか調べる。