免疫監視細胞マクロファージを用いた急性炎症応答の評価

2013 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 24592323
• Research Institution: Yamagata University
• Principal Investigator: 川前 金幸 山形大学, 医学部, 教授 (70254026)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 後藤 薫 山形大学, 医学部, 教授 (30234975)
• Keywords: 炎症応答 / ストレス / 細胞内情報伝達 / 血球細胞 / マクロファージ / RT－PCR / mRNA

Research Abstract

集中治療管理過程における生体炎症のモニターは病態予後の予測に大いに役立つと考えられている。現在の周術期モニターシステムは、薬物の投与時間と連動して血圧や血ガス等の変動を経時的にモニタリングすることを可能にしているが、惹起される炎症応答は個体により大きく異なるので、生体細胞を用いて炎症等を定量的に解析することが出来れば、生体急性炎症メカニズムの解明ひいては臨床応用に非常に有用と思われる。本研究では、生体急性炎症のモニター指標として、生体免疫機能の最前線に位置し、生体炎症応答を監視するマクロファージを含めた血球細胞に着目し、炎症応答の評価法を検討する。これまでの研究により、申請者らがこれまで解析してきた細胞内二次メッセンジャー代謝酵素ジアシルグリセロールキナーゼ（DGK）は生体ストレス応答に関与する可能性が示唆されているので、この分子ファミリーの動態を指標とした生体急性炎症のモニタリングを行う。昨年度にヒト正常血球細胞におけるDGKファミリーの発現を検討した結果、正常ヒト血液サンプルから、好中球、単球、CD４陽性T細胞、CD８陽性T細胞、B細胞を分離し、RT-PCR法を用いて、DGKファミリー分子の発現を解析した。その結果、DGKαはCD４陽性T細胞およびCD８陽性T細胞に豊富な発現が認められた。DGKγは単球に、またDGKζはB細胞以外の細胞での発現が観察された。一方、DGKεも大部分の細胞に発現が認められたが、とくにT細胞系における発現が顕著であった。本年度は、炎症応答における動物モデルを作製し、免疫細胞が豊富に見られる脾臓の解析を行った。その結果、グラム陰性菌細胞壁外膜の構成成分リポ多糖（LPS）投与群においてDGKεmRNAの発現が有意に増加することを見出した。今後は、ヒト血球系細胞株を用いて、細胞毎の炎症応答解析を行う予定である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

本研究では、生体急性炎症のモニター指標として、生体免疫機能の最前線に位置し、生体炎症応答を監視するマクロファージを主とした血球細胞に着目し、炎症応答の評価法を検討することを目的としている。昨年度は血液細胞の分離とmRNAの抽出、RT-PCR法によるDGKファミリーの発現解析を行った。今年度は、炎症の動物モデルを作製し、免疫細胞が豊富に見られる脾臓を用いてDGK mRNAの発現解析を行った。正常細胞の実験から、個体レベルに実験に研究が進展しているので、研究計画はおおむね順調に進行していると評価した。

Strategy for Future Research Activity

昨年度および今年度に得られた研究データを基に、今後は分離した血球細胞、あるいは各々の血球細胞の培養株を用いて、細胞レベルでの経時的な炎症応答を解析する。さらに、得られた知見を基に、DGKノックアウトマウスを用いて、再び個体レベルにおける炎症応答を解析する。

Research Products

• [Journal Article] Establishment of novel monoclonal antibodies KMab-1 and MMab-1 specific for IDH2 mutations (2013)
  • Author(s): Kaneko MK, Morita S, Tsujimoto Y, Yanagiya R, Nasu K, Sasaki H, Hozumi Y, Goto K, Natsume A, Watanabe M, Kumabe T, Takano S, Kato Y
  • Journal Title: Biochem Biophys Res Commun Volume: 432 Pages: 40-45
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2013.01.088
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Diacylglycerol kinaseζによるNFkB 制御機構 (2014)
  • Author(s): 土谷理恵子、飯野光喜、後藤薫
  • Organizer: 第119回日本解剖学会総会
  • Place of Presentation: 自治医科大学（栃木）
  • Year and Date: 20140327-20140329
• [Presentation] ε型ジアシルグリセロールキナーゼ欠損マウスの脂肪組織における 脂質代謝メカニズム解析 (2014)
  • Author(s): 中野知之、後藤薫
  • Organizer: 第119回日本解剖学会総会
  • Place of Presentation: 自治医科大学（栃木）
  • Year and Date: 20140327-20140329
• [Presentation] FUNCTIONAL IMPLICATIONS OF DIACYLGLYCEROL KINASE IN STRESS RESPONSE (2013)
  • Author(s): Kaoru Goto, Toshiaki Tanaka
  • Organizer: ASahct 2013, International Symposium Anatomical Science for advance in health and clinical therapy
  • Place of Presentation: Tohoku University (Sendai)
  • Year and Date: 20130827-20130828
  • Invited