2013 Fiscal Year Annual Research Report
脳内ペプチド遺伝子パラログにおける機能代償のZFN法を用いた実証
Project/Area Number |
24657050
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Research Institution | The University of Tokyo |
Principal Investigator |
岡 良隆 東京大学, 理学(系)研究科(研究院), 教授 (70143360)
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Keywords | 神経科学 / 生理学 / 脳・神経 / 動物 / 生理活性 |
Research Abstract |
Xenopus tropicalisにおける遺伝子の特異的な破壊を行うため、まず、Zinc Finger Nuclease法による遺伝子破壊を検討した。まず、実験に供するXenopus tropicalisの系統のkiss2配列をPCR法にて増幅、正確な塩基配列を決定した。その配列情報を元に、ゲノム上で二重鎖切断を引き起こすと予想されるin vitroでの切断を試みたが、複数作成したzinc finger nucleaseのなかでkiss2配列を選択的に破壊する物は見られなかった。 そこで、zinc finger nucleaseの後発かつ、切断効率が良いとされるtranscription activator-like effector nuclease (TALEN)法およびCRISPR法を試みた。認識する配列が自由に設計できる上、毒性も低いとされているが、原理自体は当初の計画に記したものとほぼ同じである。 今年度は、研究室で日常的に飼育しているメダカを用いてTALEN技術を試みたところ、TALEN mRNAによって、極めて効率的にGnRH1遺伝子を破壊することに成功した。同様にして、kiss1, gnrh1, gnrh2, gnrh3, lh, fsh, rfrp, it, vt, npff, npyaのTALENと受容体遺伝子kiss2, gpr54-1, gpr54-2, eraについてもCRISPRによる遺伝子ノックアウトメダカの作成に成功した。そこで、これと同じように、2種類のTALENを合成し、mRNAとしてインジェクションし、Xenopus tropicalisにおいてkiss2遺伝子を欠失した個体を作成中である。
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Research Products
(24 results)
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[Journal Article] A neural mechanism underlying mating preferences for familiar individuals in medaka fish.2014
Author(s)
Okuyama, T. Yokoi, S., Abe, H., Isoe, Y., Suehiro, Y., Imada, H., Tanaka, M., Kawasaki, T., Yuba, S., Taniguchi, Y., Kamei, Y., Okubo, K., Shimada, A. Naruse, K., Takeda, H., Oka, Y., Kubo, T., and Takeuchi, H.
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Journal Title
Science
Volume: 343
Pages: 91-94
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Whole brain-pituitary in vitro preparation of the transgenic medaka (Oryzias latipes) as a tool for analyzing the differential regulatory mechanisms of LH and FSH release.2014
Author(s)
Karigo, T., Aikawa, M., Kondo, C., Abe, H., Kanda, S., and Oka, Y.
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Journal Title
Endocrinology
Volume: 155
Pages: 536-547
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Sexually dimorphic expression of the sex chromosome-linked genes cntfa and pdlima in the medaka brain.2014
Author(s)
Maehiro, S., Takeuchi, A., Yamashita, J., Hiraki, T., Kawabata, Y., Nakasone, K., Hosono, K., Usami, T., Paul-Prasanth, B., Nagahama, Y., Oka, Y., Okubo, K.
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Journal Title
Biochemical and Biophysical Research Communications
Volume: 445
Pages: 113-119
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Morphological analysis of the early development of GnRH neuron systems in the EGFP-expressing transgenic medaka lines2013
Author(s)
Takahashi, A., Islam, S., Akazome, Y., Abe, H., Okubo, K., Oka, Y.
Organizer
The 43th Annual Meeting of the Society for Neuroscience 2013
Place of Presentation
San Diego,合衆国
Year and Date
20131109-20131113
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