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2014 Fiscal Year Annual Research Report

人工酵素ZFNを用いたユニバーサル遺伝子改変システムの開発

Research Project

Project/Area Number 24657156
Research InstitutionHiroshima University

Principal Investigator

山本 卓  広島大学, 理学(系)研究科(研究院), 教授 (90244102)

Project Period (FY) 2012-04-01 – 2015-03-31
Keywordsバイオテクノロジー / ゲノム編集
Outline of Annual Research Achievements

高活性型人工ヌクレアーゼPlatinum TALENを用いてウニPiwi遺伝子の破壊を試みた。Piwi遺伝子を標的とするPlatinum TALENを構築し、その mRNAを導入したウニ胚を観察したところ、Piwiの翻訳を抑制するモルフォリノアンチセンスオリゴを導入した胚と同様に、ほとんどの胚において成体原基が欠失していた。また、標的配列をPCRで増幅し、変異導入の有無を解析したところ、70%以上のゲノムに欠失変異が導入されていた。これらの結果から、Platinum TALENを用いた解析によって、後期発生における遺伝子機能解析が可能であることが証明された。
Platinum TALENを用いたホヤの体細胞および生殖細胞でのゲノム編集効率を調べたところ、生殖細胞において高い変異導入が見られた。この結果は、ホヤにおいてPlatinum TALENを用いた変異体作製が可能であることを示すものであり、今後の変異系統の確立に重要な情報を得ることができた。
アフリカツメガエルにおいてPlatinum TALENが高い変異導入効果を示すことが、以前の我々の研究によって示されていた。今回、2倍体のネッタイツメガエルにおいて、Platinum TALENを用いた甲状腺ホルモン受容体アルファの破壊を行い、発生におけるこの受容体の機能解明に成功した。本研究によって、Platinum TALENによる遺伝子破壊は様々な生物において有効であることが示された。

  • Research Products

    (4 results)

All 2015 2014 Other

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results,  Open Access: 1 results) Presentation (1 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Unliganded thyroid hormone receptor alpha regulates developmental timing via gene repression as revealed by gene disruption in Xenopus tropicalis2015

    • Author(s)
      Choi J, Suzuki KT, Sakuma T, Shewade L, Yamamoto T and Buchholz DR
    • Journal Title

      Endocrinology

      Volume: 156 Pages: 735-744

    • DOI

      10.1210/en.2014-1554

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Germ cell mutations of the ascidian Ciona intestinalis with TALE nucleases2014

    • Author(s)
      Yoshida K, Treen N, Hozumi A, Sakuma T, Yamamoto T and Sasakura Y
    • Journal Title

      Genesis

      Volume: 52 Pages: 431-439

    • DOI

      10.1002/dvg.22770

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Genome editing using Platinum TALENs2014

    • Author(s)
      Sakuma T, Suzuki KI and Yamamoto T
    • Organizer
      FASEB Science Research Conference
    • Place of Presentation
      Nassau, Bahamas
    • Year and Date
      2014-06-22 – 2014-06-27
  • [Remarks] 分子遺伝学研究室

    • URL

      http://www.mls.sci.hiroshima-u.ac.jp/smg/index.html

URL: 

Published: 2016-06-01  

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