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2013 Fiscal Year Annual Research Report

ピロリ菌病原因子OipA相互作用分子の生化学的探索

Research Project

Project/Area Number 24659200
Research InstitutionOita University

Principal Investigator

山岡 吉生  大分大学, 医学部, 教授 (00544248)

Keywordsヘリコバクター・ピロリ / 細菌 / 病原因子
Research Abstract

初年度、コムギ胚芽無細胞発現系と大腸菌発現系でHelicobacter pylori (Hp) 26695株の全長recombinant OipA(rOipA)タンパク質の発現に成功した。そして、2年目は大腸菌発現系からの全長rOipAタンパク質の精製に初めて成功し、OipAタンパク質複合体に関しての新たな知見を得ることができた。
膜タンパク質であるrOipAタンパク質は可溶化することが精製の必要条件である。そこで種々の界面活性剤を検討した結果、コール酸ナトリウムとDDMがrOipAの可溶化・精製に有効であることが分かり、Hisタグによるアフィニティー精製でrOipAタンパク精製標品を得ることに成功した。さらに、ゲル濾過により精製標品を分析したところ、精製標品中におけるrOipAタンパク質はモノマーの状態で存在することが分かった。
我々は以前に、OipA遺伝子をノックアウトしたピロリ菌株をAGS細胞に感染したところ、野生株と比較してAGS細胞からのIL-8産生が有意に低いことから、OipAタンパク質はIL-8産生を誘導する機能をもつと報告した(Yamaoka et al , PNAS , 2000)。そこで今回、AGS細胞を用いてrOipAタンパク質精製標品での感染実験を行った。その結果、モノマーとしてのrOipAタンパク質ではIL-8産生を誘導しないことが明らかとなった。このことから、OipAタンパク質はオリゴマーとして、または他の分子と複合体を形成することで機能的に働くことが示唆された。
次に、DDMで可溶化したHp26695株の膜タンパク質をサンプルとしてHigh Resolution Clear Native PAGEを行うことでOipAタンパク質複合体の解析を行った。その結果、OipAタンパク質は約700kDaの複合体を形成していることが明らかとなった。さらに2次元目にSDS-PAGEを行ったところ、4つのタンパク質で複合体が形成されていることが明らかとなった。このOipAの相互作用分子候補である4つのタンパク質については現在同定を進めている。

  • Research Products

    (26 results)

All 2014 2013 Other

All Journal Article (12 results) (of which Peer Reviewed: 7 results) Presentation (13 results) (of which Invited: 13 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Serum Helicobacter pylori CagA antibody titer as a useful marker for advanced inflammation in the stomach in Japan2014

    • Author(s)
      Shiota S, Murakami K, Okimoto T, Kodama M, Yamaoka Y.
    • Journal Title

      J Gastroenterol Hepatol

      Volume: 29(1) Pages: 67-73

    • DOI

      10.1111/jgh.12359

  • [Journal Article] Complete Genome Sequences of Eight Helicobacter pylori Strains with Different Virulence Factor Genotypes and Methylation Profiles, Isolated from Patients with Diverse Gastrointestinal Diseases on Okinawa Island, Japan, Determined Using PacBio Single-Molecule Real-Time Technology2014

    • Author(s)
      Satou K, Shiroma A, Teruya K, Shimoji M, Nakano K, Juan A, Tamotsu H, Terabayashi Y, Aoyama M, Teruya M, Suzuki R, Matsuda M, Sekine A, Kinjo N, Kinjo F, Yamaoka Y, Hirano T.
    • Journal Title

      Genome Announc

      Volume: 2 Pages: e00286-14

    • DOI

      10.1128/genomeA.00286-14

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Discovery of novel mutations for clarithromycin resistance in Helicobacter pylori by using next-generation sequencing2014

    • Author(s)
      Binh TT, Shiota S, Suzuki R, Matsuda M, Trang TT, Kwon DH, Iwatani S, Yamaoka Y
    • Journal Title

      J Antimicrob Chemother

      Volume: 未定 Pages: 未定

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Genome Sequences of Helicobacter pylori Clarithromycin-Resistant Strains.2014

    • Author(s)
      Binh TT, Suzuki R, Shiota S, Kwon DH, Yamaoka Y
    • Journal Title

      Genome Announc.

      Volume: 1 Pages: e00912-13

    • DOI

      10.1128/genomeA.00912-13

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Strategy for the Treatment of Helicobacter pylori Infection2014

    • Author(s)
      Shiota S, Yamaoka Y
    • Journal Title

      Curr Pharm Des.

      Volume: 未定 Pages: 未定

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Seroprevalence of Helicobacter pylori infection and gastric mucosal atrophy in Bhutan, a country with a high prevalence of gastric cancer2013

    • Author(s)
      Shiota S, Mahachai V, Vilaichone RK, Ratanachu-ek T, Tshering L, Uchida T, Matsunari O, Yamaoka Y.
    • Journal Title

      J Med Microbiol

      Volume: 62(Pt 10) Pages: 1571-8

    • DOI

      10.1099/jmm.0.060905-0

  • [Journal Article] Antibiotics resistance rate of Helicobacter pylori in Bhutan2013

    • Author(s)
      Vilaichone RK, Yamaoka Y, Shiota S, Ratanachu-ek T, Tshering L, Uchida T, Fujioka T, Mahachai V.
    • Journal Title

      World J Gastroenterol

      Volume: 19(33) Pages: 5508-12

    • DOI

      10.3748/wjg.v19.i33.5508

  • [Journal Article] Extremely high prevalence of Helicobacter pylori infection in Bhutan2013

    • Author(s)
      Vilaichone RK, Mahachai V, Shiota S, Uchida T, Ratanachu-ek T, Tshering L, Tung NL, Fujioka T, Moriyama M, Yamaoka Y.
    • Journal Title

      World J Gastroenterol

      Volume: 19(18) Pages: 2806-10

    • DOI

      10.3748/wjg.v19.i18.2806

  • [Journal Article] Diversity of Helicobacter pylori genotypes in Iranian patients with different gastroduodenal disorders.2013

    • Author(s)
      Vaziri F, Najar Peerayeh S, Alebouyeh M, Mirzaei T, Yamaoka Y, Molaei M, Maghsoudi N, Zali MR
    • Journal Title

      World J Gastroenterol

      Volume: 19 Pages: 5685-5692

    • DOI

      10.3748/wjg.v19.i34.5685

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Detection of prehistoric human migration by Helicobacter pylori2013

    • Author(s)
      Suzuki R, Yamaoka Y
    • Journal Title

      Nihon Rinsho

      Volume: 71 Pages: 1368-1373

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] The significance of virulence factors in Helicobacter pylori.2013

    • Author(s)
      Shiota S, Suzuki R, Yamaoka Y
    • Journal Title

      J Dig Dis

      Volume: 14 Pages: 341-349

    • DOI

      10.1111/1751-2980.12054

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Helicobacter pyloriと胃癌2013

    • Author(s)
      山岡吉生
    • Journal Title

      臨床検査

      Volume: 57 Pages: 760-766

  • [Presentation] Helicobacter pylori genomes: from pathogenesis to tool for human migration2014

    • Author(s)
      Yoshio Yamaoka
    • Organizer
      The 87th Annual meeting of Japanese Society for Bacteriology
    • Place of Presentation
      タワーホール船堀(東京都江戸川区)
    • Year and Date
      20140326-20140328
    • Invited
  • [Presentation] Carcinogenesis of Helicobacter pylori infection2014

    • Author(s)
      Yoshio Yamaoka
    • Organizer
      The 3rd Dong-A International Medical Symposium
    • Place of Presentation
      Dong-A大学(韓国釜山市)
    • Year and Date
      20140207-20140208
    • Invited
  • [Presentation] The Mongolian gerbil model2013

    • Author(s)
      Yoshio Yamaoka
    • Organizer
      XXVIth International Workshop on Helicobacter pylori and related bacteria in chronic digestive inflammation and gastric cancer
    • Place of Presentation
      Facultad de Medicina de la Univeridad Autonoma (スペインマドリッド市)
    • Year and Date
      20130912-20130915
    • Invited
  • [Presentation] Helicobacter pylori genotypes in Asian countries2013

    • Author(s)
      Yoshio Yamaoka
    • Organizer
      XXVIth International Workshop on Helicobacter pylori and related bacteria in chronic digestive inflammation and gastric cancer
    • Place of Presentation
      Facultad de Medicina de la Univeridad Autonoma (スペインマドリッド市)
    • Year and Date
      20130912-20130915
    • Invited
  • [Presentation] Helicobacter pylori Current status in Dominican Republic 1st phase2013

    • Author(s)
      Yoshio Yamaoka
    • Organizer
      XXII Congreso Nacional de Gastroenterologia
    • Place of Presentation
      ハードロックホテル(ドミニカ共和国プンタカナ市)
    • Year and Date
      20130906-20130908
    • Invited
  • [Presentation] Genetic characteristics of Helicobacter pylori and its relation to gastric cancer2013

    • Author(s)
      Yoshio Yamaoka
    • Organizer
      XXII Congreso Nacional de Gastroenterologia
    • Place of Presentation
      ハードロックホテル(ドミニカ共和国プンタカナ市)
    • Year and Date
      20130906-20130908
    • Invited
  • [Presentation] Helicobacter pyloriと生体防御

    • Author(s)
      山岡吉生
    • Organizer
      第24回日本生体防除学会
    • Place of Presentation
      くまもと森都心プラザ(熊本県熊本市)
    • Invited
  • [Presentation] ピロリ菌研究の面白さ;沖縄特有のピロリ菌の発見も含めて

    • Author(s)
      山岡吉生
    • Organizer
      第9回沖縄上部消化管の炎症を考える会
    • Place of Presentation
      ザ・ナハテラス(沖縄県那覇市)
    • Invited
  • [Presentation] アジア諸国におけるヘリコバクター・ピロリの遺伝子型:沖縄特異型を含めて

    • Author(s)
      山岡吉生
    • Organizer
      沖縄ゲノムを基盤とする知的・産業国際クラスターの形成い関する研究開発:国際シンポジウム
    • Place of Presentation
      パークホテル(沖縄県那覇市)
    • Invited
  • [Presentation] ピロリ菌感染症の臨床と研究

    • Author(s)
      山岡吉生
    • Organizer
      第303回日本内科学会地方会 生涯教育講演会
    • Place of Presentation
      ロワジールホテル(沖縄県那覇市)
    • Invited
  • [Presentation] Genotypes of Helicobacter pylori in Asian countries

    • Author(s)
      Yoshio Yamaoka
    • Organizer
      Mongolia-Japan joint symposium for Helicobacter pylori
    • Place of Presentation
      モンゴル健康科学大学(モンゴル共和国ウランバートル市)
    • Invited
  • [Presentation] Helicobacter pylori and gastric cancer in Asia: from epidemiological view

    • Author(s)
      Yoshio Yamaoka
    • Organizer
      Seoul National University Gastroenterology Meeting
    • Place of Presentation
      ソウル国立大学(韓国ソウル市)
    • Invited
  • [Presentation] ピロリ菌の分子疫学

    • Author(s)
      山岡吉生
    • Organizer
      第15回九州予防医学研究会
    • Place of Presentation
      ビーコンプラザ(大分県別府市)
    • Invited
  • [Remarks] http://www.med.oita-u.ac.jp/phealth2/index.html

URL: 

Published: 2015-05-28  

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