2013 Fiscal Year Annual Research Report
ヒト骨髄ニッチにおける造血幹細胞支持機構の解明と造血幹細胞体外増幅法の開発
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24790984
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| Research Institution | Kansai Medical University |
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Principal Investigator |
松岡 由和 関西医科大学, 医学部, 助教 (70533420)
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| Keywords | 造血幹細胞 / 間葉系幹細胞 / ニッチ |
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| Research Abstract |
1) ヒト造血幹細胞(HSC)支持因子受容体を同定するため、HSC支持因子受容体に対する阻害抗体の作製を試みた。具体的には、ヒトHSCが高度に濃縮されたヒト臍帯血由来18Lin-CD34+/-分画細胞あるいはヒト白血病細胞株であるKG-1細胞をBalb/cマウスに免疫することにより、18Lin-CD34+/-分画細胞の一部あるいは全部に反応性を示す抗体産生ハイブリドーマを約500クローン作製した。
2) 次いで、これらのハイブリドーマを自作の無血清培地に移し、その培養上清より抗体を精製した。その後、精製抗体をヒトHSC支持能を有するヒト骨髄Lin-CD271+SSEA-4+分画由来間葉系幹細胞(DP MSCと18Lin-CD34+/-細胞との共培養系に添加することにより、CD34+細胞維持・産生能を阻害する抗体のスクリーニングを行った。このスクリーニングは現在、50クローン分程度終えており、今後、残りのクローンにおいても同様のスクリーニングを行う予定である。
3) In vivoにおけるDP MSCのHSC支持能の検討を行った。具体的には、NOGマウス左脛骨に2 x 10^5/mouseのDP MSCと8,000/mouseの18Lin-CD34-細胞を骨髄内直接移植(IBMI)法にて同時に移植した。対照群には、18Lin-CD34-細胞単独で移植を行った。移植後20週目にマウスを犠牲死させ、移植部位におけるヒトCD45陽性細胞の生着率を解析した。その結果、18Lin-CD34-細胞単独で移植を行っても80%以上の非常に高いヒトCD45陽性細胞の生着を示すマウスが認められた。そのため、この系では、DP MSCによるSRC支持能を正確に評価することは困難であると考えられた。今後、新たなin vivoにおけるHSC支持能の評価系が必要である。
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