小児骨髄系造血悪性腫瘍疾患におけるＲＡＳ変異体細胞モザイクの解析

2013 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 24791054
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 村松 秀城 名古屋大学, 医学部附属病院, 助教 (00572570)
• Keywords: 若年性骨髄単球性白血病 / 体細胞モザイク / NRAS / ディープシークエンス

Research Abstract

若年性骨髄単球性白血病（Juvenile myelomoncytic leukemia; JMML)はまれな小児特有の白血病である。JMMLの原因遺伝子として、PTPN11、NRAS、KRAS、NF1、CBLの変異が知られている。これらの遺伝子変異は体細胞変異（somatic mutation)であるが、同じ遺伝子の生殖細胞系列変異（germline mutation)がNoonan症候群（PTPN11)、cardio-facio-cutaneous（CFC)症候群（RAS）、germline CBL（CBL）などの先天性遺伝疾患の原因であることが近年相次いで明らかとなった。我々は、JMMLと診断された患者の血液細胞以外の検体（爪・毛髪・口腔粘膜）由来のDNAにおける遺伝子変異の解析を通じて、偶然にも世界初となる2例のoncogenic NRAS mutationの体細胞モザイク症例を同定した。
平成24年度にこの2症例について解析を加え、英文誌上（Doisaki S, et al., Blood 2012)で報告した。
平成24年度・25年度にも継続して新規JMML症例のgermline変異解析用検体（爪・口腔粘膜由来DNA)を収集し、サンガー法・パイロシークエンス法による解析を行い、さらに3例（PTPN11の1例、NRASの2例）の体細胞モザイクが疑われる症例を同定し、合計5例の症例が蓄積した。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

平成24年度中に、世界初のNRAS体細胞モザイクを有するJMML2症例についてサンガー法、TAクローニング、パイロシークエンス法により統合的に解析し、一流英文誌上で報告することが出来た（Doisaki S, et al., Blood 2012)。また、新規JMML症例のgermline変異解析用検体（爪・口腔粘膜由来DNA)を収集し、サンガー法・パイロシークエンス法による解析を実施したところ、さらに1例のPTPN11体細胞モザイク症例、2例のNRAS体細胞モザイク症例が疑われる症例を同定した。平成25年時点での達成度としては、おおむね順調に進展していると思われる。

Strategy for Future Research Activity

研究計画時点では、低頻度アリルの体細胞モザイク症例を同定する目的でPCRアンプリコンシークエンスによるディープシークエンスを計画していたが、申請者らの研究であらたに新規遺伝子変異がRAS pathway遺伝子変異に合併するJMML症例が存在することが明らかとなった（Sakaguchi H, et al., Nature Genetics, 2013)ことから、体細胞モザイクの解析においてもこれらの新規同定遺伝子（SETBP1, JAK3)についてディープシークエンスを行うことを計画中である。
既に収集した新規JMML患者germline検体について新規同定遺伝子についても解析をすすめるとともに、平成26年度も継続してJMML患者をはじめとする小児骨髄系造血器腫瘍患者のgermline検体（爪・口腔粘膜・線維芽細胞など）を収集し、解析を行う予定である。

Expenditure Plans for the Next FY Research Funding

申請者らの研究であらたに新規遺伝子変異がRAS pathway遺伝子変異に合併するJMML症例が存在することが明らかとなった（Sakaguchi H, et al., Nature Genetics, 2013)ことから、体細胞モザイクの解析においてもこれらの新規同定遺伝子（SETBP1, JAK3)についても解析を行う必要が生じた。
既に収集した新規JMML患者germline検体について新規同定遺伝子についても解析をすすめるとともに、平成26年度も継続してJMML患者をはじめとする小児骨髄系造血器腫瘍患者のgermline検体（爪・口腔粘膜・線維芽細胞など）を収集し、次世代シークエンサーを用いた解析を行う予定である。

Research Products

• [Journal Article] Reduced intensity conditioning in allogeneic stem cell transplantation for AML with Down syndrome. (2014)
  • Author(s): Muramatsu H, Sakaguchi H, Taga T, Tabuchi K, Adachi S, Inoue M, Kitoh T, Suminoe A, Yabe H, Azuma E, Shioda Y, Ogawa A, Kinoshita A, Kigasawa H, Osugi Y, Koike K, Kawa K, Kato K, Atsuta Y, Kudo K.
  • Journal Title: Pediatr Blood Cancer Volume: 61 Pages: 925-927
  • DOI: 10.1002/pbc.24883.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Wiskott-Aldrich syndrome presenting with a clinical picture mimicking juvenile myelomonocytic leukaemia. (2013)
  • Author(s): Yoshimi A, Kamachi Y, Imai K, Watanabe N, Nakadate H, Kanazawa T, Ozono S, Kobayashi R, Yoshida M, Kobayashi C, Hama A, Muramatsu H, Sasahara Y, Jakob M, Morio T, Ehl S, Manabe A, Niemeyer C, Kojima S.
  • Journal Title: Pediatric blood & cancer Volume: 60 Pages: 836-841
  • DOI: 10.1002/pbc.24359
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The landscape of somatic mutations in Down syndrome-related myeloid disorders. (2013)
  • Author(s): Yoshida K, Toki T, Okuno Y, Muramatsu H, Hasegawa D, Nakamura K, Kanegane H, Tsukamoto K, Adachi S, Kawakami K, Kato K, Nishimura R, Izraeli S, Hayashi Y, Miyano S, Kojima S, Ito E, Ogawa S.
  • Journal Title: Nature genetics Volume: 45 Pages: 1293-1299
  • DOI: 10.1038/ng.2759
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Exome sequencing identifies secondary mutations of SETBP1 and JAK3 in juvenile myelomonocytic leukemia. (2013)
  • Author(s): Sakaguchi H, Okuno Y, Muramatsu H, Yoshida K, Shiraishi Y, Takahashi M, Kon A, Sanada M, Chiba K, Tanaka H, Makishima H, Wang X, Xu Y, Doisaki S, Hama A, Nakanishi K, Takahashi Y, Yoshida N, Maciejewski JP, Miyano S, Ogawa S, Kojima S.
  • Journal Title: Nature genetics Volume: 45 Pages: 937-941
  • DOI: 10.1038/ng.2698.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Somatic SETBP1 mutations in myeloid malignancies. (2013)
  • Author(s): Makishima H, Yoshida K, Muramatsu H, Sakaguchi H, Paquette RL, McDevitt MA, Kojima S, Saunthararajah Y, Miyano S, Shih LY, Du Y, Ogawa S, Maciejewski JP.
  • Journal Title: Nature genetics Volume: 45 Pages: 942-946
  • DOI: 10.1038/ng.2696
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Spliceosomal gene mutations are frequent events in the diverse mutational spectrum of chronic myelomonocytic leukemia but largely absent in juvenile myelomonocytic leukemia. (2013)
  • Author(s): Kar SA, Jankowska A, Makishima H, Visconte V, Jerez A, Sugimoto Y, Muramatsu H, Traina F, Afable M, Guinta K, Tiu RV, Przychodzen B, Sakaguchi H, Kojima S, Sekeres MA, List AF, McDevitt MA, Maciejewski JP.
  • Journal Title: Haematologica Volume: 98 Pages: 107-113
  • DOI: 10.3324/haematol.2012.064048.
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Somatic Mosaicism of RAS Pathway Gene Mutations in Juvenile Myelomonocytic Leukemia (2013)
  • Author(s): Xinan Wang, Hideki Muramatsu, Hirotoshi Sakaguchi, Yinyan Xu, Atsushi Narita, Sayoko Doisaki, Nozomu Kawashima, Olfat Ismael, Koji Nakanishi, Asahito Hama, Yoshiyuki Takahashi, Seiji Kojima
  • Organizer: 第55回日本小児血液学会
  • Place of Presentation: ヒルトン福岡シーホーク、福岡市
  • Year and Date: 20131129-20131201