2012 Fiscal Year Research-status Report
微小粒子は、関節リウマチの形質細胞様樹状細胞を刺激し自然免疫反応を引き起こすか
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24791522
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Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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| Research Institution | Yamagata University |
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Principal Investigator |
高窪 祐弥 山形大学, 医学部, 助教 (80431641)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 国際情報交換 |
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| Research Abstract |
インフォームドコンセントが得られた関節リウマチ患者から関節液を採取し、Guiducciらの方法 (Guiducci S, Arthritis Rheum, 2008)に準じ、はじめに1,500 Gで10分間遠心し上清を採取しました。再度、1,500 Gで5分間遠心し、残存している細胞成分を除去し、その上清を採取しました。その上清を、100,000 Gで20分間遠心し、遠心管の底に集まったpellet：微小粒子を取り出しました。そのpelletを専用のapop buffer (5mM KCl、 1 mM MgCl2、136 mM NaCl、pH 7.4)で溶解し、fluorescein isothiocyanate (FITC)-標識アネキシンV標識により、FACS解析と共焦点レーザー顕微鏡により微小粒子を確認しました。
また、申請者らがすでに確立した方法 (Takakubo Y, J. Rheumatol, 2008)で、関節リウマチ患者の関節液、末梢血、健常人末梢血からFicoll-Paquによりmononuclear cellを分離し、plasmacytoid DC (pDC)のマーカーであるBDCA4標識ビーズを添加、Auto MACSTM Separator (Miltenyi Biotec, Germany)によりpositive selection(正の選択)を行いました。分離したpDCは、FACS解析、サイトスピン（集細胞遠心装置）による蛍光免疫染色法により、pDC マーカーであるBDCA-2、CD123抗体を用い、pDCを確認しました。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
関節リウマチ患者の関節液から微小粒子を採取し、その同定を行うことができました。また、関節リウマチ患者の関節液、末梢血、健常人末梢血からFicoll-Paquによりmononuclear cellを分離し、plasmacytoid DC (pDC)を採取できたことより、おおむね順調に進展していると考えます。
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| Strategy for Future Research Activity |
自己細胞のアポトーシスやネクローシスによって生成する内因性物質、微小粒子（microparticle）を関節リウマチ患者から採取した形質細胞様樹状細胞に反応させ、微小粒子がどのように作用するかその反応機構を明らかにします。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
該当なし
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