2014 Fiscal Year Annual Research Report
同種移植による歯髄再生を目指した歯髄幹細胞の免疫制御因子の同定
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24792164
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| Research Institution | National Center for Geriatrics and Gerontology |
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Principal Investigator |
村上 真史 独立行政法人国立長寿医療研究センター, 再生歯科医療研究部, 研究員 (30614531)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 同種移植 / 免疫制御 / 歯髄幹細胞 / 培養上清 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、同種移植による歯髄再生を目指して、歯髄幹細胞の免疫制御因子を明らかにし、その因子を利用した同種移植の可能性を探ることを目的とする。本年度は、ブタ歯髄、骨髄、脂肪CD31- SP細胞培養上清の濃縮液を用いた混合リンパ球培養反応 (Mixed Lymphocyte reaction：MLR)にて、歯髄CD31- SP細胞培養上清が最も末梢血リンパ球の増殖を抑制した、という結果から、マイクロアレイや、Millipore社のMILLIPLEX MAG KITを使用し、免疫制御因子の絞り込みと、その効果の検討を行った。
ブタ歯髄、骨髄、脂肪CD31- SP細胞のマイクロアレイの結果を解析し、歯髄CD31- SP細胞で骨髄、脂肪CD31- SP細胞と比較して発現量が高く、免疫制御に関する報告がある因子を探索した。次に、探索した因子のタンパク発現について、ブタ歯髄、骨髄、脂肪CD31- SP細胞の細胞溶解液を用いて、Western Blottingにて解析した。その結果、MCP-1 (Monocyte Chemotactic Protein-1)が歯髄CD31- SP細胞において、骨髄、脂肪CD31- SP細胞と比較して高発現であることがわかった。また、Millipore社のMILLIPLEX MAG KITを用いて、歯髄幹細胞培養上清濃縮液中のMCP-1を定量し、他の因子と比較して多く含まれていることがわかった。
そこで、MCP-1リコンビナントタンパクを購入し、in vitroにおける免疫抑制効果を検討した。マクロファージのモデルとして、ヒト急性単球性白血病細胞株THP-1細胞をPMAにてマクロファージ様細胞に分化誘導した上で、IFN-γ並びにLPSにて刺激し、そこへ歯髄幹細胞培養上清濃縮液、あるいはMCP-1タンパクを添加することによる、炎症反応抑制因子、IL-10、IDO mRNA発現の変化を測定した。その結果、歯髄幹細胞培養上清濃縮液、MCP-1タンパク添加時に、それらの発現が増加することがわかった。従って、歯髄幹細胞培養上清濃縮液、MCP-1タンパクによって、炎症反応が抑制される可能性が示唆された。
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