2014 Fiscal Year Annual Research Report
ウイルス表層機能ドメイン解析に基づく新次元DDSキャリアの開発
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25242043
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
黒田 俊一 名古屋大学, 生命農学研究科, 教授 (60263406)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | ナノバイオ / ナノ粒子 / 生物工学 / 薬物送達 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
（１）ヒト由来ウイルス外皮タンパク質のナノ粒子（VLP）としての発現：ヒト由来ウイルス群（約２０種類）から、外皮タンパク質をコードする遺伝子を単離し、出芽酵母系に導入し、約１５種類のウイルスについてVLPが生成することを確認し、約１０種類のVLPについてmg単位で精製することができた（昨年度まで）。今年度は、残りの大量にVLPが取得できなかったウイルス（約１０種類）について同様に検討を行い、最終的に１８種類のウイルスについて大量にVLPを得ることに成功した。
（２）得られたVLPの細胞内動態および生体内動態の解析：１）上記VLPを蛍光標識して、各親ウイルスの感染可能細胞の培養液中に添加し、細胞内への取り込みを共焦点顕微鏡下で評価した。その結果、約半数のVLPは細胞特性をもって細胞内に侵入できることを見出した（１８種類のVLP中、細胞内侵入能を有するものは１２種類であった）。２）培養細胞で特異的な細胞内導入に成功したVLPについては、標的細胞の腫瘍を背部皮下に形成させたヌードマウスに、静脈注射した後、In Vivoイメージング装置により生体内動態を解析した。その多くが、細網内皮系（RES）に富む臓器（肝臓、肺、腎臓等）に集積したが、親ウイルスと同じ感染経路（血液を介して伝播するウイルスは静脈注射、インフルエンザウイルスの場合は経鼻投与、経気道投与、パピローマウイルスの場合は経膣投与）に関して検討したところ、最終的に８種類のVLPについて、生体内での標的化能及び細胞内侵入能を有することが確認された。
（３）上記８種類のVLPについて、能動的標的化能、ステルス能、細胞内侵入能を示す部位を人工ナノキャリア（ポリスチレンビーズ）表層に合成ペプチドを提示する手法で絞込を行っており、実際に新規なドメインを見出すことに成功している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
交付申請書に記載した計画と同等の進捗状況である。
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| Strategy for Future Research Activity |
引き続きVLP化していないウイルス、生体内標的化能を示さないVLP、細胞内侵入能を示さないVLPの解析も行う。特に先行している８種類のVLPについては、（１）能動的標的化ドメイン、（２）ステルス能ドメイン、（３）細胞内侵入能ドメインの同定を進めた後、既存DDSキャリアへの能動的標的化ドメイン、ステルス能ドメイン、細胞内侵入ドメインの搭載を行う。
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[Journal Article] Specific delivery of microRNA93 into HBV-replicating hepatocytes downregulates protein expression of liver cancer susceptible gene MICA2014
Author(s)
Ohno M, Otsuka M, Kishikawa T, Shibata C, Yoshikawa T, Takata A, Muroyama R, Kowatari N, Sato M, Kato N, Kuroda S, and Koike K.
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Journal Title
Oncotarget
Volume: 5
Pages: 5581-5590
Peer Reviewed
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[Journal Article] A cisplatin‑incorporated liposome that targets the epidermal growth factor receptor enhances radiotherapeutic efficacy without nephrotoxicity2014
Author(s)
Jung J, Jeong SY, Park SS, Shin SH, Ju EJ, Choi J, Park J, Lee JH, Kim I, Suh YA, Hwang JJ,
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Journal Title
Int J Oncology
Volume: 46
Pages: 1268-1274
DOI
Peer Reviewed
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