2013 Fiscal Year Annual Research Report
発症メカニズムを解明する病態光イメージングマウスの構築
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25250012
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| Research Institution | Tokyo Institute of Technology |
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Principal Investigator |
近藤 科江 東京工業大学, 生命理工学研究科, 教授 (40314182)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
近藤 玄 京都大学, 再生医科学研究所, 教授 (40243258)
水島 友子 公益財団法人実験動物中央研究所, 試験事業部, 研究員 (90311240)
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| Project Period (FY) |
2013-10-21 – 2016-03-31
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| Keywords | 病態イメージング / トランスジェニックマウス / 生体発光イメージング / HIF / 発がん |
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| Outline of Annual Research Achievements |
疾患の発症のメカニズム解明や診断法・治療法の開発を行うには、疾患モデルマウスを用いた研究が有効である。本研究では、生体レベルで低酸素誘導転写因子HIFの活性を発光イメージングでモニターできるトランスジェニック(Tg)マウスを改良、および、新規レポーター遺伝子を構築して作出し、既存のTgマウスより高感度に病態イメージングが可能なマウスを構築することをめざしている。平成25年度は、以下の3つの研究課題を実施した。
（１）検出感度の良いレポーター遺伝子の構築：低酸素環境下でLuciferaseおよび蛍光タンパク（sfGFP, mRuby2, mOrange）を発現する3種類のレポーター遺伝子5HRE-CMVmp-luc2-sfGFP、5HRE-CMVmp-Luc2-mRuby2、5HRE-CMVmp-mOrange-luc2を構築した。
（２）Tgマウスの改良：既存のTgマウスは、FVBという一般的でない遺伝的背景にあるために汎用性が低い。そこでこの系統をC57BL/6(B6)系統に戻し交配し、コンジェニック系統を作出することとした。本年度は、９回(N９)まで戻し交配を行った。
（３） 新規Tgマウスの作出：（１）で構築したレポーター遺伝子をインジェクション用にトリミングおよび精製し、マウス受精卵（系統：BALB/cByJJcl）にマイクロインジェクション法により遺伝子導入し、Tgマウスの作出を行った。
（４）がん病態イメージングに適したrasH2マウスの作出（アルビノ化）：in vivoイメージングによる超早期発がん検出に用いるrasH2マウスの毛色（Agouti）をin vivoイメージングに適した白色（Albino）にするため、アルビノマウスとの交配によりrasH2マウスにチロシナーゼ変異（Try[X]）を導入したTgrasH2/Try[X]マウスの作出を開始した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究は、既存のHOL-Tｇの高感度化・多機能化を図る事により、生体光イメージングを用いた病態イメージングの有用性を高めることを目的としている。研究の初年度にあたる本年度は、3つの研究を実施する計画をたて、以下の様な結果を得た。
（１）検出感度と解析効率の改良をめざした３つのレポーター遺伝子の構築は、予定通りに完了した。
（２）（３）Tgマウスの改良・作出では、途中Tgマウスを飼育するための装置（アイソレーター）が故障し、Tgマウスの評価ができない時期もあったが、当初の計画から大幅に遅れる事も無く、改良・作出ともほぼ計画通りに実施できた。新規レポーターのTgマウス作出においては、卵の発生率および産仔が少なく、Tgが作出できないものもあった。
（４）がん病態イメージングに適したrasH2マウスの作出（アルビノ化）も、順調に進んだ。
以上の様に、計画した3つの研究も実施することができ、結果も良好であるため、上記のような自己点検による評価を下した。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成26年度は、Tgマウスの改良・作出を終了させ、平成27年度に実施を計画している病態イメージングに向けて計画通り、研究を進める。
１．Tgマウスの改良：既存のTgマウスをFVB からC57BL/6(B6)系統に戻し交配し、コンジェニック系統を完了させる。
２．新規レポーターのTgマウス作出：新規Tg作出において、平成25年度に卵の発生率および産仔が少なく、Tgが作出できないものについて、引き続きレポーター遺伝子を卵にマイクロインジェクション法により遺伝子導入し、Tgマウスの作出を試み、Tgの構築をめざす。
３．イメージングに適したrasH2マウスの作出（アルビノ化）：アルビノ化を完了させ、RasH2アルビノマウスのとの交配によりrasH2マウスにチロシナーゼ変異（Try[X]）を導入したTgrasH2/Try[X]マウスの作出を完了し、オリジナルのrasH2と同様の発がん感受性を保持しているかどうかを確認するため、発がん感受性比較実験を実施する。
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[Journal Article] Radiosynthesis and initial evaluation of (18)F labeled nanocarrier composed of poly(L-lactic acid)-block-poly(sarcosine) amphiphilic polydepsipeptide.2013
Author(s)
Yamamoto F, Yamahara R, Makino A, Kurihara K, Tsukada H, Hara E, Hara I, Kizaka-Kondoh S, Ohkubo Y, Ozeki E, Kimura S.
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Journal Title
Nucl Med Biol.
Volume: 40
Pages: 387-394
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] The protective role of transmembrane thioredoxin-related protein TMX in inflammatory liver injury.2013
Author(s)
Matsuo Y, Irie K, Kiyonari H, Okuyama H, Nakamura H, Son A, Lopez-Ramos DA, Tian H, Oka S, Okawa K, Kizaka-Kondoh S, Masutani H, Yodoi J.
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Journal Title
Antioxid Redox Signal.
Volume: 18
Pages: 1263-1272
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] An in vitro ES cell-based clock recapitulation assay model identifies CK2α as an endogenous clock regulator.2013
Author(s)
Umemura Y, J. Yoshida, M. Wada, Y. Tsuchiya, Y. Minami, H. Watanabe, G. Kondoh, J. Takeda, H. Inokawa, K. Horie, K. Yagita.
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Journal Title
PLoS ONE
Volume: 8
Pages: e67241
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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