2014 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
25253071
|
|---|
| Research Institution | The Institute of Physical and Chemical Research |
|---|
Principal Investigator |
川上 敏明 独立行政法人理化学研究所, 統合生命医科学研究センター, チームリーダー (60143418)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
出原 賢治 佐賀大学, 医学部, 教授 (00270463)
松本 健治 独立行政法人国立成育医療研究センター, 免疫アレルギー研究部, 部長 (60181765)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
|
| Keywords | アトピー性皮膚炎 / マスト細胞 / Phospholipase C-β3 / Stat5 / TSLP / Periostin |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
昨年発表の我々の研究により、Phospholipase C-β3(PLCb3) KOマウスでアトピー性皮膚炎(atopic dermatitis, AD)様の皮膚炎が自然に発症し、その発症にStat5を介したマスト細胞の活性化が重要であることが示された(Ando et al., Cell Reports, 2014)。
１．ダニ抗原誘発性のAD様皮膚炎にはTSLP受容体と高親和性IgE受容体(FcεRI - マスト細胞や好塩基球で高発現)が重要であることをあきらかにしている(Ando et al., Journal of Investigative Dermatology, 2014)が、抗体Ba103のよる好塩基球の除去実験や２種類の好塩基球の欠損マウス(BasTRECKマウスとMcpt8-
DTRマウス)を用いた実験により、好塩基球は必須ではないことを明らかにした（論文執筆中）。
２．PLCβ3-/-;FcεR1a-/-二重KOマウスはPLCβ3-/-マウスと同様に皮膚炎を自然発症する。PLCβ3-/-;MyD88-/-二重KOマウスは現在皮膚炎が発症するか否か観察中である。
３。PLCβ3遺伝子のfloxedマウスが１系統樹立されており、Stat5 floxedマウスとともに、各種のCre発現マウスと掛け合わせていて、繊維芽細胞におけるPLCβ3, Stat5, Stat6によるPeriostin産生制御機序およびケラチノサイトでのPLCb3によるTSLPの産生制御機序を解析するin vitro実験を開始しつつある。後述のCRISPR-Cas9系で遺伝子を切断した繊維芽細胞やおよびケラチノサイトも用いて、これらの実験を開始できるまでになった。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
繊維芽細胞・ケラチノサイト・マスト細胞などで遺伝子を迅速に切断するため、CRISPR-Cas9系を導入した。DNA切断酵素Cas9をsgRNAを用いて、狙い通りのDNA部位を切断するために、sgRNAのデザインをより正確にするための方法を見いだした（論文執筆中）。この方法を用いて、SykやLat遺伝子を破壊すると、FcεRIを介したマスト細胞の活性化が完全に阻害されることを確認した。現在、繊維芽細胞のPLCβ3, Stat5, Stat6等の遺伝子を破壊する実験を施行中であり、この点では予定より遅れているが、CRISPR-Cas9系を早期に導入したことは充分価値のあることと判断している。また、Jak-Stat5 阻害剤をダニ抗原誘発性のAD様皮膚炎で検討する件は、相手方（トロント大学）の事情で阻害剤が入手できず、かつ、他の研究グループにより同様の研究がなされた（Jak阻害剤は有効）ことから、断念せざるをえなかった。
|
| Strategy for Future Research Activity |
上述の通り、CRISPR-Cas9系を導入した。このことは計画の変更にあたるが、CRISPR-Cas9系を早期に使いこなし、狙い通りのDNA部位を切断するために、sgRNAのデザインをより正確にするための方法を見いだしたことは充分価値のあることと判断している。AD様皮膚炎にマスト細胞上のFcεRIが重要であることから、CRISPR-Cas9系を用いた新たなFcεRI signaling moleculesも探索している。以上の変更により、本研究の目的の大半は、最終年度中に達成できるめどが立つとともに、所期以上の成果が生まれることが期待できる。
|
Research Products
(15 results)
-
-
-
-
-
[Journal Article] Signal-transducing adaptor protein-2 controls the IgE-mediated, mast cell-mediated anaphylactic responses2014
Author(s)
Sekine, Y., Nishida, K., Yamasaki, S., Muromoto, R., Kon, S., Kashiwakura, J., Saitoh, K., Togi, S., Yoshimura, A., Oritani, K., and Matsuda, T.
-
Journal Title
Journal of Immunology
Volume: 192
Pages: 3488-3495
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] Expression of Mas-related gene X2 on mast cells is upregulated in the skin of patients with severe chronic urticaria2014
Author(s)
Fujisawa, D., Kashiwakura, J., Kita, H., Kikukawa, Y., Fujitani, Y., Sasaki-Sakamoto, Y., Kuroda, K., Nunomura, S., Hayama, K., Terui, T., Ra, C., and Okayama, Y.
-
Journal Title
Journal of Allergy and Clinical Immunology
Volume: 134
Pages: 622-633
DOI
Peer Reviewed
-
[Journal Article] Systemic lupus erythematosus complicated with liver cirrhosis in a patient with Papillon-Lefevre syndrome2014
Author(s)
Yasudo, H., Ando, T., Takeuchi, M., Nakano, H., Itonaga, T., Takehara, H., Isojima, T., Miura, K., Harita, Y., Takita, J., and Oka, A.
-
Journal Title
Lupus
Volume: 23
Pages: 1523-1527
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
-
-
-
-
-
