2013 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子改変マウスを用いた精子機能タンパク質発現と不妊発症に関する細胞生物学的研究
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25293041
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
年森 清隆 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20094097)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
伊藤 千鶴 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (80347054)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 授精 / 受精 / 精子 / 卵子 / 遺伝子改変マウス / Equatorin / エクアトリン / 不妊症 |
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| Research Abstract |
１．エクアトリンEquatorin（Eqtn,Mn9)について： 1)Eqtn-EGFPトランスジェニック(Tg)マウス精子を用いて、先体反応/膜融合から卵活性に至る頭部変化をlive imagingとして取得し、電顕像と比較情報を得た。 2) 遺伝子/タンパク質の情報より、エクアトリンはヒトを含み哺乳動物に広く存在することがわかった。3) Eqtn KOマウス交配実験の解析から、ホモ精子では電顕を含む微細構造レベルで顕著な変化を起こさず受精能が減少した。エクアトリンはIzumo1とはindependentに機能していた。4) EQT-mCherry Tgマウスを作製するためのinjectionを終え、genotyping を待っている段階である。5) Equatorin糖鎖部（特にepitope部）を解析するため様々の可溶化を試みた結果、極めて難溶性であることが分かった。
２．CD9, ODF2, PLC, MMP2, MN13について：1) Eqtn KOマウスでは、これらの分子が破壊されず残っている結果を得た。CD9が存在していても授精能が減少するため、CD9とはindependentに機能することが判明した。2) ODF2 Tgについて Live imaging、微細構造、卵活性/胚発生を観察したところ、 ODF2が残る近い時期まで、エクアトリンが残存することが判明した。3) MMP2はエクアトリン機能発現に直接影響しないことが判明した。4) MN13はエクアトリン機能発現に直接影響しないことが判明した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
エクアトリン分子が難溶性であり精製と機能解析が難しいため、エクアトリン分子が相互作用する相手方分子の同定が難しい点で遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
エクアトリンに関しては解析が進み、論文作成中である。その他の分子の解析についても、ほぼ計画通り進んでいるため、今後はその確認作業を行っていく。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
購入予定している機器の取り付けと性能を評価するため、デモ機を現存顕微鏡に取り付けて取り付け状況と性能をチェックしたところ、機器を現存顕微鏡への取り付け部と取り付けた場合の顕微鏡側のハンドル操作に不具合が生じた。そのため、すぐに購入できなかった。そこでその解決を試みたところ、予定機器側に若干の修正を行うことにより解決することが判明した。その解決の遅れのため、年度内の設置ができなかったことが理由である。
上記理由が判明し、その解決についてもメーカーとの協議が終了したため、次年度にはいったらすぐに発注し、入手次第実験を開始する。デモ器での確認により、当該研究者が目的とする操作は行うことができる。また、良い結果も得られる見通しである。
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Research Products
(26 results)
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[Journal Article] A heterozygous mutation of GALNTL5 affects male infertility with impairment of sperm motility.2014
Author(s)
Takasaki N, Tachibana K, Ogasawara S, Matsuzaki H, Hagiuda J, Ishikawa H, Mochida K, Inoue K, Ogonuki N, Ogura A, Noce T, Ito C, Toshimori K, Narimatsu H.
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Journal Title
Proc Natl Acad Sci USA.
Volume: 111
Pages: 1120-1125
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Oligo-astheno-teratozoospermia in mice lacking ORP4, a sterol-binding protein in the OSBP-related family.2014
Author(s)
Udagawa O, Ito C, Ogonuki N, Sato H, Lee S, Tripvanuntakul P, Ichi I, Uchida Y, Nishimura T, Murakami M, Ogura A, Inoue T, Toshimori K, Araki H.
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Journal Title
Genes Cells.
Volume: 19(1)
Pages: 13-27
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] The Arf GAP SMAP2 is Necessary for Organized Vesicle Budding from the Trans-Golgi-network and Subsequent Acrosome Formation in Spermiogenesis.2013
Author(s)
Funaki T, Kon S, Tanabe K, Natsume W, Sato S, Shimizu T, Yoshida N, Wong WF, Ogura A, Ogawa T, Inoue K, Ogonuki N, Miki H, Mochida K, Endoh K, Yomogida K, Fukumoto M, Horai R, Iwakura Y, Ito C, Toshimori K, Watanabe T, Satake M.
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Journal Title
Mol Biol Cell.
Volume: 24(17)
Pages: 2633-2644
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Tysnd1 deficiency in mice interferes with the peroxisomal location of PTS2 enzymes, causing lipid metabolic abnormalities and male infertility.2013
Author(s)
Mizuno Y, Ninomiya y, Nakachi Y, Iseki M, Iwasa H, Akita M, Tsukui T, Shimozawa N, Ito C, Toshimori K, Nishimura M, Hara H, Maeba R, Okazaki T, Alodaib AN, Amoudi MA, Jacob M, Alkuraya FS, Horai Y, Watanabe M, Motegi H, Wakana S, Noda T, Kurochkin IV, Mizuno Y, Schonbach C, Okazaki Y.
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Journal Title
PLoS genet.
Volume: 9(2)
Pages: e1003286
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Galnt3 deficiency disrupts acrosome formation and leads to oligoasthenoteratozoospermia.2013
Author(s)
Miyazaki T, Mori M, Yoshida CA, Ito C, Yamatoya K, Moriishi T, Kawai Y, Komori H, Kawane T, Izumi S, Toshimori K, Komori T.
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Journal Title
Histochem and Cell Biol.
Volume: 139(2)
Pages: 339-354
DOI
Peer Reviewed
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