2013 Fiscal Year Annual Research Report
患者由来歯髄幹細胞を応用した口唇口蓋裂の発症機序の解明と治療法の開発
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25293405
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
山座 孝義 九州大学, 歯学研究科(研究院), 講師 (80304814)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山座 治義 九州大学, 歯学研究科(研究院), 講師 (30336151)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 乳歯幹細胞 / 口唇口蓋裂 / 再生医療 |
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| Research Abstract |
CL/P患者３名の乳歯歯髄より乳歯歯髄より幹細胞(CL/P-SC)を単離に成功した。CL/P-SCの幹細胞学的特徴を解析するため、３名の正常患者より乳歯幹細胞(Cont-SC)も単離した。両者の幹細胞学的特徴を解析すると、コロニー形成能、細胞増殖能、幹細胞マーカーの発現ならびに多分化能のいずれもCL/P-SCが劣っていた。
次に、培養CL/P-SCならびにCont-SCより全蛋白質および全RNAを抽出し、ウェスタンブロティング法およびRT-PCR法を用いてTGF-βシグナル(TGFBRI, TGFBRII, TGFBRIII, Smad2/3, phospho-Smad2/3, p38, phospho-p38, ERK, phospho-ERK, Akt, phospho-Akt)の異常を蛋白質レベルおよび遺伝子レベルで検索した。TGFBRIおよびTGFBRIIIはCL/P-SCならびにCont-SCで遺伝子・タンパク質レベルで同等の発現強度を示したが、TGFBRIIはCont-SCに比べてCL/P-SCにおいて有意に低下していた。しかしながら、DNAシークエンス法によりCL/P-SCにおけるTGFBRII遺伝子の変異等の異常は認められなかった。
さらに下流シグナルをウェスタンブロティング法にて解析したところ、Smad2/3, phospho-Smad2/3, p38, phospho-p38, Akt, phospho-Aktのいずれも両者の間に発現強度に変化が認められなかった。一方、ERKのレベルは同等であったが、phospho-ERKのレベルがCL/P-SCで有意に上昇していた。
以上の結果から、CL/P-SCはCont-SCと比較して幹細胞生物学的に障害を受けている事が示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
初年度の計画を計画通りに遂行した。
解析をおこなって順調な結果を得てきたが、シグナル解析の研究で一部予想とは異なる結果も得られ、研究計画に僅かな修正が必要な場合もあった。
修正は予想していたシグナル分子以外のものだったため、基本計画自体の大幅な変更は必要なかった。
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| Strategy for Future Research Activity |
初年度の結果から予想に反したシグナル分子が標的とする解析に移らねばならないが、計画自体の根幹を変える必要はない。
従って、今後は基本的には当初の計画通りに遂行し、結果を積み上げてゆく。
ただし、仮説と異なる結果を得る可能性もあるため、十分に結果を逐一精査しつつ、また予想外の結果に即座に対応できる体制を備えておくように心がける。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
研究遂行上、多少計画を変更せねばならなかった。
計画変更後、速やかに必要物品の購入のための選定に当たったが、適切な試薬が確定できず次年度へ繰り越した。
すでに必要とする試薬を選定しており、購入手続きをとり速やかに物品費として使用する予定である。
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[Journal Article] Ossifying Fibroma Tumor Stem Cells Are Maintained by Epigenetic Regulation of a TSP1⁄TGF-β⁄SMAD3 Autocrine Loop.2013
Author(s)
Qin H, Qu C, Yamaza T,Yang R, Lin X, Duan XY, Akiyama K, Liu Y, Zhang Q, Chen C, Chen Y, Qi HH, Feng XH, Le AD, Shi S.
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Journal Title
Cell Stem Cell.
Volume: 13
Pages: 577-589
DOI
Peer Reviewed
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