2015 Fiscal Year Annual Research Report
改良型二次元インゲルホスファターゼアッセイの確立とホスファターゼ研究の新展開
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25350978
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| Research Institution | Kagawa University |
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Principal Investigator |
亀下 勇 香川大学, 農学部, 教授 (60127941)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
末吉 紀行 香川大学, 農学部, 准教授 (90346635)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | タンパク質リン酸化反応 / プロテインホスファターゼ / 活性制御機構 / カルモジュリンキナーゼ / ツーハイブリッドスクリーニング / 活性制御因子 / 翻訳後修飾 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究課題は、以下の２点に焦点を絞って研究を実施してきた。（１）ホスファターゼ活性をゲル内で検出するインゲルホスファターゼアッセイ法を確立し、ホスファターゼ研究に応用する。（２）CaMKホスファターゼ（CaMKP）をはじめとして様々なホスファターゼの活性制御メカニズムに関する研究を発展させる。インゲルホスファターゼアッセイ法の確立に関しては昨年度までにほぼ完了しているので、本年度は２番目の課題に取り組み以下の成果を上げることができた。
CaMKPは、多機能性CaMキナーゼを特異的に脱リン酸化してCaMキナーゼカスケードを負に制御する酵素である。このCaMKPのN末端領域にはポリリシンなどの人工的なポリカチオンが結合して、CaMKP活性を増大させることが知られていた。しかし、細胞内にこのようなポリカチオンに代わる活性化因子が存在するのか、またその正体は何かについてはこれまで不明であった。今回、大腸菌ツーハイブリッドスクリーニング法を用いて、CaMKPの結合タンパク質のスクリーニングを行ったところ、Pcdh-γC5がCaMKP結合タンパク質であることを見出した。このPcdh-γC5は、GSTプルダウン実験からCaMKPのN末端領域に結合すること、またこのタンパク質の結合によりリン酸化CaMKIの脱リン酸化を促進することを明らかにした。また、細胞内でもCaMKPとPcdh-γC5とCaMKIが３者複合体を形成し、リン酸化CaMKIの脱リン酸化を補助することが示された。これらの研究からPcdh-γC5がCaMKPとその基質であるCaMKを同時に結合することにより、内在性の "positive regulator” として機能する可能性が強く示唆された。
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| Remarks |
研究室のホームページに最近の研究業績が記載されている。
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[Journal Article] Expression analysis of splice variants of zebrafish cyclin-dependent kinase-like 5 and its substrate, amphiphysin 12016
Author(s)
Katayama, S., Senga, Y., Oi, A., Miki, Y., Sugiyama, Y., Sueyoshi, N., Kameshita, I.
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Journal Title
Gene
Volume: 583
Pages: 15-23
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] The phosphatase-resistant isoform of CaMKI, Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase I-delta (CaMKI-delta), remains in its 'Primed' form without Ca2+-stimulation.2015
Author(s)
Senga, Y., Ishida, A., Shigeri, Y., Kameshita, I., Sueyoshi, N.
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Journal Title
Biochemistry
Volume: 54
Pages: 3617-3630
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Expression and phosphorylation state analysis of intracellular protein kinases using Multi-PK antibody and Phos-tag SDS-PAGE2015
Author(s)
Sugiyama, Y., Katayama, S., Kameshita, I., Morisawa, K. Higuchi, T., Todaka, J., Kinoshita, E., Kinoshita-Kikuta, E., Koike, T., Taniguchi, T., Sakamoto, S.
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Journal Title
MethodsX
Volume: 2
Pages: 469-474
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Effects of calmodulin on expression of lignin-modifying Enzyme in Pleurotus ostreatus.2015
Author(s)
1)Suetomi, T., Sakamoto, T., Tokunaga, Y., Kameyama, T., Honda, Y., Kamitsuji, H., Kameshita, I., Izumitsu, K., Suzuki, K. and Irie, T.
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Journal Title
Curr Genet
Volume: 61
Pages: 127-140
DOI
Peer Reviewed
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