2013 Fiscal Year Research-status Report
悪性グリオーマ由来がん性幹細胞を標的とした新規ヒト化抗体医薬の創製
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25430166
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Shizuoka Cancer Center Research Institute |
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Principal Investigator |
秋山 靖人 静岡県立静岡がんセンター(研究所), その他部局等, その他 (70222552)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 抗体医薬 / がん性幹細胞 / ヒト化マウス |
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| Research Abstract |
グリオーマ患者腫瘍組織より幹細胞培地（human EGF, FGF, LIF+B-27)にて樹立したがん性幹細胞株3種類(GB-SCC010, 026, 028)に特異的に発現する遺伝子をDNA Gene Chip(human Genome U133A 2.0 Array, Affimetrix)を用いて14種類同定した。対照群は、同一腫瘍より血清培地で樹立した細胞株を使用した。同定された14個の遺伝子群は、すべて発現比が10倍以上亢進していた(P<0.01)。これらのうちタンパク質の局在が細胞外であり、NCIのthe Repository of Molecular Brain Neoplasia Data (REMBRANDT) データベース検索にて予後因子となるものを選別した結果、10個の遺伝子に絞り込んだ。この中でYKL-40, Clusterin, Periostinに関してsiRNAまたはshRNAを用いてこれらの遺伝子の幹細胞の生物活性に対する影響を評価した。まず細胞増殖に関しては、YKL-40およびClusterinの発現を抑制した細胞において有意に抑制効果が確認された。今後残りの7種類の遺伝子に関してもsiRNAによる評価を行うとともに、YKL-40およびClusterinについては、NOG-IL-4 Tｇマウスを利用したヒト抗体の作製に取り掛かる。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
選別した遺伝子全体のsiRNAによる評価は終了していないが、一部の標的遺伝子に関しては、すでにヒト抗体作製の作業に取り掛かっている。具体的にNOG-IL-4 Tgマウスを用いた組換えタンパクの免疫を介したヒト抗体の作製プロトコールについては、技術的に確立されている。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成26年度は、10種類の標的遺伝子に関してsiRNAにて増殖制御がかかる遺伝子を早めに同定後、組換えタンパクを作製してNOG-IL-4 Tgマウスへの免疫を開始する。2回マウスに免疫後、抗体価の上昇を確認した後、特異的抗体を産生するB細胞の同定・選別による抗体遺伝子クローニング法やヒトハイブリドーマ作製技術を利用したヒト抗体作製を実施する。免疫による抗体価の上昇が認められない場合には、ADLib技術を利用した抗体作製に切り替える。このためカイオム社との研究打ち合わせを効率的に行う。
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