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2013 Fiscal Year Research-status Report

コクシジウム原虫の腸管内発育ステージにおける低酸素適応エネルギー代謝の解明

Research Project

Project/Area Number 25450436
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Research InstitutionNational Agriculture and Food Research Organization

Principal Investigator

松林 誠  独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構, 動物衛生衛生研究所細菌・寄生虫研究領域, 主任研究員 (00321076)

Project Period (FY) 2013-04-01 – 2016-03-31
KeywordsEimeria tenella / RNA sequencing / エネルギー代謝 / real-time PCR
Research Abstract

鶏Eimeria によるコクシジウム症の制御は、養鶏農家における生産性向上に直結する重要な課題である。しかし、現行の抗コクシジウム剤は、詳細な薬理作用が不明のものが多い。最も病原性の高いE. tenella は、盲腸粘膜固有層での第二代無性生殖期にシゾントが約数十倍の大きさとなり、内部に200個以上のメロゾイトを包含する。我々は、シゾントの爆発的増殖にはエネルギー産生がその生存基盤を支えていると考えている。しかし、発育の場となる腸管内は低酸素環境下であり、一般に知られる代謝経路とは異なる酸素を用いないエネルギー代謝系が作動し寄生適応していると推測している。本研究課題では、Eimeria 原虫のステージ変換による代謝適応、およびステージ特異的な代謝経路を明らかにし標的分子を同定して、鶏や人体に影響のない安全な薬剤を創出することを目的とした。本年度は、エネルギー代謝関連の基盤情報を得るため、精製が容易な外界発育期について、RNA Sequencing を行った。E. tenella (NIAH株)の生鮮オーシストを28℃で培養し、0、24、48、96時間後の胞子形成中のオーシスト、およびin vitro で脱嚢させたスポロゾイトからtotal RNA を精製し、cDNA を合成後、Genome Analyzer IIxにより塩基配列を決定した。Assemble の結果得られたcontigについて、NCBI database等によりBLAST検索を行い、アノテーション付けを行った。結果、E. tenella の代謝関連酵素の遺伝子配列を決定することができた。いくつかの代謝関連酵素についてReal-time PCR によりmRNA発現の定量解析を行い、胞子形成後48時間でこれらの発現が最も高いことが分かった。また、エネルギー産生の中心となるミトコンドリア複合体IIの部分配列を得て、RACEにより全長を解読した。予測されるアミノ酸配列からペプチド抗体、および大腸菌によりリコンビナントタンパク質を作成し、ポリクローナル抗体を作製できた。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

RNA Sequencing の解析結果から、原虫の各種エネルギー代謝関連酵素および呼吸鎖関連酵素の塩基配列が明らかとなった。これにより、腸管内発育ステージでの比較が可能となった。

Strategy for Future Research Activity

今後は、腸管内発育ステージのエネルギー代謝関連の発現解析、および原虫のミトコンドリアの精製方法を確立し、またその酵素活性を測定する。

  • Research Products

    (8 results)

All 2014 2013

All Journal Article (5 results) (of which Peer Reviewed: 5 results) Presentation (3 results)

  • [Journal Article] Age-related detection and molecular characterization of Cryptosporidium suis and Cryptosporidium scrofarum in pre-and post-weaned piglets and adult pigs in Japan.2014

    • Author(s)
      Takeshi Yui, Toshiyuki Nakajima, Norishige Yamamoto, Marina Kon, Niichiro Abe, Makoto Matsubayashi, Tomoyuki Shibahara.
    • Journal Title

      Parasitology Research

      Volume: 113(1) Pages: 359-65.

    • DOI

      10.1007/s00436-013-3662-2.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Survey on gastrointestinal parasites and detection of Cryptosporidium spp. on cattle in West Java, Indonesia2014

    • Author(s)
      Sylvia Maharani Ananta, Suharno, Adi Hidayat, Makoto Matsubayashi.
    • Journal Title

      Asian Pacific Journal of Tropical Medicine.

      Volume: 7(3) Pages: 197-201

    • DOI

      10.1016/S1995-7645(14)60020-1

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Localization of eimeripain, an Eimeria tenella cathepsin B-like cysteine protease, during asexual and sexual intracellular development in chicken ceca2014

    • Author(s)
      Makoto Matsubayashi, Takeshi Hatta, Takeharu Miyoshi, Anisuzzaman, Kazumi Sasai, Kayoko Yamaji, Kameo Shimura, Takashi Isobe, Kiyoshi Kita, Naotoshi Tsuji.
    • Journal Title

      Journal of Veterinary Medical Science

      Volume: 76(4) Pages: 531–537

    • DOI

      10.1292/jvms.13-0509

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Elongation Factor-1α is a Novel Protein Associated with Host Cell Invasion and a Potential Protective Antigen of Cryptosporidium parvum.2013

    • Author(s)
      Makoto Matsubayashi, Isao Teramoto-Kimata, Shigehiko Uni, Hyun S. Lillehoj, Haruo Matsuda, Masaru Furuya, Hiroyuki Tani, Kazumi Sasai.
    • Journal Title

      Journal of Biological Chemistry

      Volume: 288(47) Pages: 34111-20

    • DOI

      10.1074/jbc.M113.515544.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] High-throughput RNA sequencing profiles and transcriptional evidence of aerobic respiratory enzymes in sporulating oocysts and sporozoites of Eimeria tenella.2013

    • Author(s)
      Makoto Matsubayashi, Takeshi Hatta, Takeharu Miyoshi, Anisuzzaman, Kazumi Sasai, Kameo Shimura, Takashi Isobe, Kiyoshi Kita, Naotoshi Tsuji.
    • Journal Title

      Infection, Genetics and Evolution

      Volume: 18 Pages: 269-76

    • DOI

      10.1016/j.meegid.2013.06.002.

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 次世代シークエンサーを用いたEimeria tenella 強毒株と弱毒株スポロゾイトの遺伝子発現プロファイリング2014

    • Author(s)
      松林 誠、川原 史也、八田 岳士、三好 猛晴、山岸 潤也、Anisuzzaman M、磯部 尚、北 潔、岩田 晃、辻 尚利.
    • Organizer
      第83回日本寄生虫学会大会学術集会
    • Place of Presentation
      愛媛大学
    • Year and Date
      20140327-20140328
  • [Presentation] Eimeria tenella 強毒株と弱毒株スポロゾイトの網羅的遺伝子発現比較解析2013

    • Author(s)
      松林 誠、川原史也、八田岳士、三好猛晴、山岸潤也、アニスザマン、志村亀夫、磯部 尚、北潔、岩田 晃、辻 尚利.
    • Organizer
      第11回分子寄生虫・マラリア研究フォーラム
    • Place of Presentation
      長崎大学
    • Year and Date
      20131002-20131003
  • [Presentation] Eimeria tenella 強毒株と弱毒株スポロゾイトの比較トランスクリプトーム解析. 、238.2013

    • Author(s)
      松林 誠、川原 史也、八田 岳士、三好 猛晴、山岸 潤也、M  アニスザマン、志村 亀夫、磯部 尚、岩田 晃、辻 尚利.
    • Organizer
      第156回日本獣医学会学術集会
    • Place of Presentation
      岐阜大学
    • Year and Date
      20130920-20130922

URL: 

Published: 2015-05-28  

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