2015 Fiscal Year Annual Research Report
溺死の診断のためのLAMP法を用いた簡易迅速スクリーニング検査法の開発
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25460871
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| Research Institution | University of Miyazaki |
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Principal Investigator |
柿崎 英二 宮崎大学, 医学部, 准教授 (70284833)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
湯川 修弘 宮崎大学, 医学部, 教授 (30240154)
酒井 正博 宮崎大学, 農学部, 教授 (20178536)
小澤 周二 三重大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (20379944) [Withdrawn]
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 法医学 / 溺死 / 水棲微生物 / Aeromonas属 / LAMP法 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は，簡便かつ迅速な溺死のスクリーニング検査法を開発することである．そのため，指標とする細菌の対象は，種レベルではなく，多数の種を一度に検出可能な属レベルであることが望ましい．そこで，本研究では淡水溺死の指標としてAeromomas属細菌を広く検出可能な検出システムを開発した．
平成27年度は，溺死例ないし非溺死例の計34例144試料について，肺組織（右肺下葉内部，左肺上葉辺縁部）及び血液試料（左心血，右心血，大腿静脈血）中のAeromonas属細菌の存在を明らかにするための調査を行った．先ず，溺死ないし溺死の可能性が高い事例として，淡水域10例（48試料)，汽水域5例（23試料)，海水域10例（47試料），また非溺死例（ないし極少量の水を吸引した可能性がある事例）として，9例26試料について，肺組織は0.2 g，血液試料は1 mLを凍結後，ビーズクラッシャー装置を用いて物理的に細胞を破壊した．次いで，Proteinase K及びSDSを用いてさらに組織を化学的に溶解し，次いでシリカメンブレン法によってゲノムDNAを精製した．得られたDNA試料をテンプレートとして，本研究で開発したLAMP法を試みた結果，優れた有効性が示された．今後，さらに事例を追加し、これらの結果をまとめ，国際誌に投稿する予定である．なお，すべての事例について，従来の強酸（発煙硝酸）を用いた珪藻の検出を行った（左右の肺，腎臓，肝臓）．さらに，多くの事例について，選択平板培地を用いて，血液試料（左心血，右心血，大腿静脈血）中の生菌の検出・同定を行った．
また，溺死に関する本研究を進めいく上で，珪藻の検査は必要不可欠である．そこで我々は酵素（Papain）を用いて珪藻を安全かつ簡便・迅速に検出可能な方法を開発した．今後，これらの結果もまとめ，国際誌に投稿する予定である．
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Research Products
(1 results)
