B型肝炎ウイルスの増殖能を規定する要因：ポリメラーゼ蛋白アミノ酸変異の意義

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25461010
• Research Institution: Saitama Medical University
• Principal Investigator: 持田 智 埼玉医科大学, 医学部, 教授 (20219968)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中山 伸朗 埼玉医科大学, 医学部, 准教授 (40292015) ; 菅原 通子 埼玉医科大学, 医学部, 講師 (20406458)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: HBV / polymerase / terminal protein domain / 核酸アナログ / B型慢性肝炎

Outline of Annual Research Achievements

核酸アナログ投与中止後の血清HBV-DNA量増加速度が速い症例では，HBV株のポリメラーゼ領域terminal protein domain（TPD）のaa15-17がDDEで，酸性アミノ酸が連続していた。一方，遅い症例のHBV株は何れかが中性アミノ酸に変異ていた。この上昇速度で3群に分類し，genotypeがBj株のaa15-17のアミノ酸配列は異なるが，同一塩基から転写されるコア領域の配列が共通しているものを選択して，Huh7細胞に導入し，培養上清のHBV-DNA濃度を測定した。培養6時間後のHBV-DNA濃度は，生体内で増殖速度の速い群では，中間群と比すと5倍，遅い群とは10倍高値であった。以上より，TPDのaa15-17のアミノ酸配列は生体内のみならずin vitroでもその増殖速度を規定していることが明らかになった。このことを検証するために，各群の患者から単離したHBV株に単塩基変異を加えて，塩基配列が他の群のHBV株と同様にした場合の，増殖速度の喧嘩を検討中である。また，増殖速度が遅いことが知られているgenotype AeのHBV株は，同領域のアミノ酸配列がほぼ全例でDDGであることが，自験例での検討およびデータベースの解析から判明した。
以上より，TPDのaa15-17のアミノ酸配列は，HBV感染症の病態を考慮する際に重要な情報であり，臨床検査に供する価値があると考えられた。この領域は塩基の変異が多彩であるが，direct sequencing以外で塩基配列を確定する方法として，cycling-probe法に注目した。HBVにこの方法を導入する予備検討として，同様に塩基の変異が多いHCVのHS5A蛋白に注目し，DAA治療の効果を規定するNS5A-Y93H変異株を定量する方法を開発した。この検討で得られた知見を基に，HBVのポリメラーゼTPDのアミノ酸配列を確定する方法を検討中である。

Research Products

• [Journal Article] Development of rare RAVs that are extremely tolerant against NS5A inhibitors during daclatasvir/asunaprevir therapy via a two-hit mechanism. (2016)
  • Author(s): Uchida Y, Kouyama J, Naiki K, Sugawara K, Inao M, Imai Y, Nakayama N, Mochida S.
  • Journal Title: Hepatology Research Volume: Feb 15 Pages: in press
  • DOI: 10.1111/hepr.12673. [Epub ahead of print.]
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Nationwide prospective and retrospective surveys for hepatitis B virus reactivation during immunosuppressive therapies. (2016)
  • Author(s): Mochida S, Nakao M, Nakayama N, Uchida Y, Nagoshi S, Ido A, Mimura T, Harigai M, Kaneko H, Kobayashi H, Tsuchida T, Suzuki H, Ura N, Nakamura Y, Bessho M, Dan K, Kusumoto S, Sasaki Y, Fujii H, Suzuki F, Ikeda K, Yamamoto K, Takikawa H, Tsubouchi H, Mizokami M.
  • Journal Title: Journal of Gastroenterology Volume: Feb 1 Pages: in press
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Significance of variants associated with resistance to NS5A inhibitors in Japanese patients with genotype 1b hepatitis C virus infection as evaluated using cycling-probe real-time PCR combined with direct sequencing. (2016)
  • Author(s): Uchida Y, Kouyama J, Naiki K, Sugawara K, Ando S, Nakaoa M, Motoya D, Inao M, Imai Y, Nakayama N, Mochida S.
  • Journal Title: Journal of Gastroenterology Volume: 51 Pages: 260-270
  • DOI: 10.1007/s00535-015-1106-8.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Revised criteria for classification of the etiologies of acute liver failure and late-onset hepatic failure in Japan: A report by the Intractable Hepato-Biliary Diseases Study Group of Japan in 2015. (2015)
  • Author(s): Mochida S, Nakayama N, Ido A, Takikawa Y, Yokosuka O, Sakaida I, Moriwaki H, Genda T, Takikawa H.
  • Journal Title: Hepatology Research Volume: Nov 28 Pages: in press
  • DOI: 10.1111/hepr.12626 [Epub ahead of print].
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Frequent Emergences of Rare RAVs Showing Extreme Resistance to NS5A Inhibitors during Dual Oral Therapy with Daclatasvir Plus Asunaprevir in Patients Previously Receiving Triple Therapy with Simeprevir. (2015)
  • Author(s): Yoshihito UCHIDA, Nobuaki NAKAYAMA, Jun-ichi KOUYAMA, Kayoko NAIKI, Hayato UEMURA, Kayoko SUGAWARA, Mie INAO, Satoshi MOCHIDA
  • Organizer: The Liver Meeting, AASLD
  • Place of Presentation: St Francisco,USA
  • Year and Date: 2015-11-13 – 2015-11-17
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Nationwide Prospective Survey in Japan to Clarify the Incidence of Viral Reactivation in Patients with Prior HBV Infection Receiving Immunosuppressive Therapies (2015)
  • Author(s): Masaaki NAKAO, Nobuaki NAKAYAMA, Yoshihito UCHIDA, Masashi MIZOKAMI and Satoshi MOCHIDA
  • Organizer: The Liver Meeting, AASLD
  • Place of Presentation: St Francisco,USA
  • Year and Date: 2015-11-13 – 2015-11-17
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Clinical Features and Outcome of Patients with Acute Liver Failure and LOHF due to HBV Reactivation during and after Immunosuppressive and/or Anticancer Therapies Enrolled in Nationwide Survey in Japan (2015)
  • Author(s): Nobuaki NAKAYAMA, Yoshihito UCHIDA, Masamitsu NAKAO, Hirohito TSUBOUCH, Hjime TAKIKAWA and Satoshi MOCHIDA
  • Organizer: The Liver Meeting, AASLD
  • Place of Presentation: St Francisco,USA
  • Year and Date: 2015-11-13 – 2015-11-17
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] NS5A領域のアミノ酸変異に基づいたIFNフリー治療の戦略：サイクリング・プローブ法を用いた検討 (2015)
  • Author(s): 内田義人，菅原通子，持田 智
  • Organizer: JDDW 2015
  • Place of Presentation: 東京 グランドﾌﾟﾘﾝｽホテル新高輪 （東京都港区）
  • Year and Date: 2015-10-08 – 2015-10-11
• [Presentation] NS5Aアミノ酸変異を考慮したC型慢性肝疾患の治療戦略とダクラタスビル・アスナプレビル併用療法の有用性 (2015)
  • Author(s): 中山伸朗，内田義人，持田 智
  • Organizer: 第51回日本肝臓学会総会
  • Place of Presentation: 熊本 ホテル日航熊本（熊本県熊本市）
  • Year and Date: 2015-05-19 – 2015-05-20
• [Presentation] B型肝炎の治療におけるテノホビルの意義 (2015)
  • Author(s): 中尾将光，中山伸朗，持田 智
  • Organizer: 第51回日本肝臓学会総会
  • Place of Presentation: 熊本 ホテル日航熊本（熊本県熊本市）
  • Year and Date: 2015-05-19 – 2015-05-20
• [Presentation] NS5Aアミノ酸変異を有するHCV感染例に対するアスナプレビル・ダクラタスビル経口2剤併用療法の有効性を規定する要因 (2015)
  • Author(s): 内田義人，神山淳一，持田 智
  • Organizer: 第51回日本肝臓学会総会
  • Place of Presentation: 熊本 ホテル日航熊本（熊本県熊本市）
  • Year and Date: 2015-05-19 – 2015-05-20