2013 Fiscal Year Research-status Report
筋萎縮性側索硬化症原因遺伝子とＲＮＡ編集酵素との連関カスケードに基づく治療戦略
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25461266
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | University of Tsukuba |
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Principal Investigator |
詫間 浩 筑波大学, 医学医療系, 講師 (00326258)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
玉岡 晃 筑波大学, 医学医療系, 教授 (50192183)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 筋萎縮性側索硬化症 / RNA編集 / 相互作用 |
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| Research Abstract |
孤発性筋萎縮性側索硬化症(ALS)の原因としてグルタミン酸受容体サブユニットGluA2のRNA編集異常が考えられている。近年になり家族性ALS原因遺伝子が次々と同定されてきているが、その中にはRNA関連タンパク質の遺伝子も多く、孤発例でも遺伝子変異が同定されるものも多い。既にそれらのうちTDP-43は、RNA編集酵素であるADAR2と関連することが分かってきており、他にもADAR2と相互作用を有するものの存在が想定される。本研究では、ADAR2と関連するALS原因遺伝子を同定し、ADAR2の発現調節によってALSにおける運動ニューロン死を抑制し、これにより孤発性・家族性ALSの包括的な新規治療戦略の構築を目的とする。
初年度である平成25年度はALS原因遺伝子のクローニングより始めた。ADAR2と相互作用を及ぼす候補として、家族性ALS遺伝子群からRNA結合活性を持つangiogenin (ALS 9)、ataxin2 (ALS 13)、C9orf72 (ALS -FTD2)、FUS/TLS (ALS 6)、senataxin (ALS 4)、TAF15を選出した。それらのうちFUS/TLSに加えてTAF15について野生型と変異型のクローニングを終了し、GFPタグ付きin vivo導入用プラスミドを構築した。またコントロールとしてoptineurinのプラスミドも構築した。これにより次年度からのin vivo実験系における主要なプラスミドの準備が整った。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
平成25年度はもともと多くの候補遺伝子のクローニングを予定しており、時間的に切迫するものと予想されていた。さらに候補のうちにはトリプレットリピートを含むものもあり、試みたものの難渋したためである。計画全体としては方向性も変わることなく進めることができると考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成25年度に作成したプラスミドを用いて導入し、RNA発現を検討することになる。計画では平成25年度に培養細胞系を用いた検討を行うこととしていたが、RNA発現は細胞環境に大きく依存すると考えられ、培養細胞では充分な環境とはいえず、in vitroの検討だけでは正しい情報が得られない可能性が高い。このため実験の進捗状況も鑑み、本来の目的であるin vivoでの検討を予定通り平成26年度に行う事とする。それに伴いRT-PCRによるRNA編集の解析と共にマウス脳組織の解析も行うこととする。
プラスミド構築が困難である候補遺伝子については前記計画と同時進行でさらに構築を試みるが、あまり拘泥することなく平成25年度に構築したものでin vivoでの解析を進めることとする。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
抗体購入を予定していたが、国内在庫が無く年度内に納入できなかったため。
平成25年度には分子生物学用試薬など多くの物品購入を行ったが、若干の残額が生じた。平成26年度にも同様の試薬などの購入に加え、多くの実験用動物(マウス)、抗体などの組織学的試薬などが必要となる。また成果の発表ならびに情報収集のために学会参加も必要である。
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[Journal Article] Exome analysis reveals a Japanese family with spinocerebellar ataxia, autosomal recessive 1 without increase in serum alpha-fetoprotein level2013
Author(s)
Yaeko Ichikawa, Hiroyuki Ishiura, Jun Mitsui, Yuji Takahashi, Shunsuke Kobayashi, Hiroshi Takuma, Ichiro Kanazawa, Shinichi Morishita, Jun Goto, Shoji Tsuji
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Journal Title
J Neurological Sciences
Volume: 331
Pages: 158-60
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Two japanese cases of adult onset myopathic form of glutaric acidemia type II2013
Author(s)
S Yamaguchi, K Yamada, H Kobayashi, T Takahashi, Y Hasegawa, J Purevsuren, T Ohkubo, M Watanabe, T Tsunemi, A Ishii, H Takuma, A Tamaoka, Y Shigematsu, S Fukuda
Organizer
12th International Congress of Inborn errors of Metablism
Place of Presentation
Barcelona（スペイン）
Year and Date
20130903-20130906
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