ペプチドミクスで同定した血管炎の新たなバイオマーカーの臨床的意義の基盤解析

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25461489
• Research Institution: St. Marianna University School of Medicine
• Principal Investigator: 尾崎 承一 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (00231233)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 黒川 真奈絵 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 准教授 (90301598)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: ANCA関連血管炎 / ペプチドミクス / アポリポタンパク

Outline of Annual Research Achievements

昨年度までの解析で血清中のAC13とその親蛋白であるアポ蛋白の一部が交差反応を示したため、ELISAでの血清AC13の測定結果に影響することが明らかとなった。今年度はアポ 蛋白の影響を除去する方法を考案した。
(1) 遠心式限外濾過フィルター10Kを用いて、血清検体からあらかじめアポ蛋白を含む分画を除去したのち、ELISA でAC13を測定したところ、アポ蛋白の影響を受けずにAC13を測定することができるようになった。(2) 血中AC13のイオン強度を質量分析で定量する方法を確立した。一定量の安定同位体標識AC13と、濃度を段階的に調整した非標識AC13の混合液を作製し、弱陽イオン交換によりペプチドを抽出し質量分析で測定したところ、AC13のモル数とペプチドイオン強度との間に非常に高い相関を示した。
(1)の方法で、新たに得られた顕微鏡的多発血管炎患者14症例（活動群8例、非活動群6例）と対照疾患（変形性関節症）患者14症例の血清AC13を測定したが、両疾患群間ならびに活動性・非活動性群間で明らかな差は認められなかった。今後は、同一検体を(1)(2)の方法で比較検討するとともに、さらに多くの症例で血中AC13の測定を行い、臨床的意義を幅広く解析する必要がある。
一方、これまでの研究でAC13をヒト微小血管内皮細胞 (hMVEC)の培養系に添加するとIL-6およびIL-8の産生が増加したことより、hMVECがAC13の受容体を発現しているかを調べた。hMVECをビオチン標識AC13に続いてAlexa488標識ストレプトアビジンで染色したところ、AC13のアミノ酸の配列を変えた対照ペプチドを用いた場合に比較し、高い蛍光強度が観察され、hMVEC におけるAC13受容体の発現が示唆された。今後は、この系を用いて受容体の単離等の解析を進めていく必要がある。

Research Products

• [Journal Article] Aberrant glycosylation of lumican in aortic valve stenosis revealed by a proteomic analysis. (2016)
  • Author(s): Suzuki H, Chikada M, Yokoyama MK, Kurokawa MS, Ando T, Furukawa H, Arito M, Miyairi T, Kato T.
  • Journal Title: Int Heart J Volume: 19(57) Pages: 104-111
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Left heart abonormalities in connective tissue diseases patients with precapillary pulmonary hypertension as well as borderline mean pulmonary arterial pressure. (2015)
  • Author(s): Tsuchida K, Yamada H, Yamasaki Y, Suzuki K, Kongoji K, Akashi Y, Ozaki S.
  • Journal Title: Mod Rheumatol Volume: 25(5) Pages: 744-747
  • DOI: 10.3109/14397595.2015.1005871
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Clinical subsets associated with different anti-aminoacyl transter RNA synthetase antibodies and their association with coexisting anti-Ro52. (2015)
  • Author(s): Yamasaki Y, Satoh M, Mizushima M, Okazaki T, Nagafuchi H, Ooka S, Shibata T, Nakano H, Ogawa H, Azuma K, Maeda A, Tonooka K, Ito H, Takakuwa Y, Inoue M, Kiyokawa T, Tsuchida K, Matsushita H, Mikage H, Murakami Y, Jason Y. F. Chan, Ozaki S, Yamada H.
  • Journal Title: Mod Rheumatol Volume: 1 Pages: in press
  • DOI: 10.3109/14397595.2015.1091155
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Serum peptides as candidate biomarkers for dementia with Lewy bodies. (2015)
  • Author(s): Suzuki I, Noguchi M, Arito M, Sato T, Omoteyama K, Maedomari M, Hasegawa H, Suematsu N, Okamoto K, Kato T, Yamaguchi N, Kurokawa MS.
  • Journal Title: Int J Geriatr Psychiatry Volume: 30 Pages: 1195-1206
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Altered acetylation of proteins in patients with rheumatoid arthritis, revealed by acetyl-proteomics. (2015)
  • Author(s): Arito M, Nagai K, Ooka S, Sato T, Takakuwa Y, Kurokawa MS, Sase T, Okamoto K, Suematsu N, Kato T.
  • Journal Title: Clin Exp Rheumatol Volume: 33 Pages: 877-886
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Effects of methotrexate and salazosulfapyridine on protein profiles of exosomes derived from a human synovial sarcoma cell line of SW982. (2015)
  • Author(s): Tsuno H, Suematsu N, Sato T, Arito M, Matsui T, Iizuka N, Omoteyama K, Okamoto K, Tohma S, Kurokawa MS, Kato T.
  • Journal Title: Proteomics - Clin Applications Volume: 1 Pages: in press
  • Peer Reviewed
• [Presentation] プロテオミクスを用いたRAの病態解析 (2015)
  • Author(s): 黒川真奈絵、有戸光美、加藤智啓
  • Organizer: 第43回日本関節病学会
  • Place of Presentation: 札幌コンベンションセンター(北海道・札幌市)
  • Year and Date: 2015-11-05 – 2015-11-06
• [Presentation] シェドミクス法の確立に関する研究 (2015)
  • Author(s): 表山和樹、有戸光美、佐藤利行、岡本一起、末松直也、黒川真奈絵、加藤智啓
  • Organizer: 日本プロテオーム学会2015年会
  • Place of Presentation: 熊本森都心プラザ(熊本県・熊本市)
  • Year and Date: 2015-07-23 – 2015-07-24
• [Presentation] Serum peptides as candidate biomarkers for dementia with Lewy bodies. (2015)
  • Author(s): Kurokawa MS, Arito M, Sato T, Omoteyama K, Suematsu N, Okamoto K, Kato T.
  • Organizer: 日本プロテオーム学会2015年会
  • Place of Presentation: 熊本森都心プラザ(熊本県・熊本市)
  • Year and Date: 2015-07-23 – 2015-07-24
• [Presentation] Serum peptides as candidate biomarkers for dementia with Lewy bodies. (2015)
  • Author(s): Kurokawa MS, Suzuki I, Noguchi M, Arito M, Sato T, Omoteyama K, Maedomari M, Hasegawa H, Suematsu N, Okamoto K, Kato T, Yamaguchi N.
  • Organizer: 第11回日本臨床プロテオーム研究会
  • Place of Presentation: 国立がん研究センター(東京都・中央区)
  • Year and Date: 2015-05-23 – 2015-05-23
• [Presentation] Aberrant Glycosylation of Lumican in Aortic Valve Stenosis Revealed by a Proteomic Analysis. (2015)
  • Author(s): Suzuki H, Chikada M, Yokoyama M, Kurokawa MS, Furukawa H, Arito M, Miyairi T, Kato T.
  • Organizer: 23th ASCVTS 2015
  • Place of Presentation: 香港
  • Year and Date: 2015-05-11 – 2015-05-11
• [Presentation] 日本人集団におけるANCA関連血管炎の遺伝要素 (2015)
  • Author(s): 土屋尚之、長谷部成美、日高操希、佐藤憲映、小林茂人、山田秀裕、古川宏、山縣邦弘、住田孝之、宮坂信之、富間重人、尾崎承一、松尾清一、橋本博史、槇野博史、有村義宏、針谷正祥、川崎綾
  • Organizer: 第59回日本リウマチ学会総会・学術集会
  • Place of Presentation: 名古屋国際会議場(愛知県・名古屋市)
  • Year and Date: 2015-04-23 – 2015-04-25
• [Presentation] リツキシマブによる寛解導入療法が行われたANCA関連血管炎13例の有用性の検討 (2015)
  • Author(s): 大慈彌久絵、松下広美、内田貞輔、三冨博文、伊東宏、山崎宜興、大岡正道、岡崎貴裕、山田秀裕、尾崎承一
  • Organizer: 第59回日本リウマチ学会総会・学術集会
  • Place of Presentation: 名古屋国際会議場(愛知県・名古屋市)
  • Year and Date: 2015-04-23 – 2015-04-25
• [Presentation] ANCA関連血管炎における好中球ミエロペルオキシターゼの酸化修飾 (2015)
  • Author(s): 内田貞輔、永井宏平、佐藤利行、大岡正道、有戸光美、尾崎承一、黒川真奈絵、加藤智啓
  • Organizer: 第59回日本リウマチ学会総会・学術集会
  • Place of Presentation: 名古屋国際会議場(愛知県・名古屋市)
  • Year and Date: 2015-04-23 – 2015-04-25
• [Presentation] サーフェスオミックスを利用したサラゾスルファピリジンの作用の解析 (2015)
  • Author(s): 表山和樹、佐藤利行、有戸光美、末松直也、黒川真奈絵、加藤智啓
  • Organizer: 第59回日本リウマチ学会総会・学術集会
  • Place of Presentation: 名古屋国際会議場(愛知県・名古屋市)
  • Year and Date: 2015-04-23 – 2015-04-25
• [Presentation] ヒト関節軟骨細胞におけるLayilinを介したシグナルによる炎症因子の誘導 (2015)
  • Author(s): 有戸光美、黒川真奈絵、表山和樹、遊道和雄、中村洋、別府諸兄、加藤智啓
  • Organizer: 第59回日本リウマチ学会総会・学術集会
  • Place of Presentation: 名古屋国際会議場(愛知県・名古屋市)
  • Year and Date: 2015-04-23 – 2015-04-25