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2015 Fiscal Year Annual Research Report

多血小板血漿による軟骨分化の分子メカニズムの解明 -軟骨再生薬創薬を目指して-

Research Project

Project/Area Number 25462358
Research InstitutionThe University of Tokyo

Principal Investigator

池田 敏之  東京大学, 医学部附属病院, 助教 (80322759)

Project Period (FY) 2013-04-01 – 2016-03-31
Keywordsクリオプレシピテート / 多血小板血漿 / 軟骨分化 / 輸血療法 / 転写因子 / 選択的スプライシング
Outline of Annual Research Achievements

2015年度に解析した転写因子EMX1, EMX2について作成したアデノウィルスベクターをヒトMSCに強制発現させる系で解析を行った。2つの転写因子のうちEMX2にはエクソン2 の選択的スプライシングによるshort/longの2種類のアイソフォームが存在する。リアルタイプRT-PCRや細胞染色法による機能評価からEMX1よりEMX2の方が軟骨分化誘導能が高いこと、EMX2のうちshort isoformはより初期の、long isoformは後期の軟骨分化を誘導することが明らかになり、EMX2の選択的splicing が軟骨分化進行のスイッチとして働いている可能性が示唆された。TAp63betaとの協調作用をヒトMSCで確認したところALP染色、Col-IIの免疫染色でEMX2のlong isoform との協調作用が確認された。以上の結果からp63やEMX2などのスプライシング制御が軟骨分化に大きな影響を与えることが想定されたためESE結合分子であるSRSFファミリー分子の発現ベクターを作成し軟骨分化に与える影響を検証した。プロモーターレポーターアッセイによるスクリーニングの結果SRSF5がSOX6やCOL2A1の転写活性を上昇させるという結果が得られた。ヒトMSCにおける軟骨分化モデルとしては、実際に臨床現場で広く利用されているクリオプレシピテート(以下クリオ)に着目した。クリオを作用させたMSCで実際にCOL2A1, SOX6などの軟骨分化マーカーの誘導やalcian blue 染色で示される軟骨基質産生やALP染色で示される軟骨分化を確認できた他、細胞増殖能も上昇していた。一方でPRPやクリオプレシピテートそのものによる軟骨分化の程度は条件検討後も限定的で、SDS-PAGEや2次元電気泳動では特異的なバンドまたはスポットを確認することはできなかった。

  • Research Products

    (4 results)

All 2016 2015 Other

All Presentation (3 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results) Remarks (1 results)

  • [Presentation] 脳神経外科手術における自己血輸血の安全性・有効性 その12016

    • Author(s)
      高柳俊作、池田敏之 他
    • Organizer
      日本自己血輸血学会
    • Place of Presentation
      札幌コンベンションセンター(北海道札幌市)
    • Year and Date
      2016-03-11 – 2016-03-12
  • [Presentation] 脳神経外科手術における自己血輸血の安全性・有効性 その22016

    • Author(s)
      川端みちる、池田敏之 他
    • Organizer
      日本自己血輸血学会
    • Place of Presentation
      札幌コンベンションセンター(北海道札幌市)
    • Year and Date
      2016-03-11 – 2016-03-12
  • [Presentation] Identification and characterization of molecular basis of Del mutations in the Japanese population2015

    • Author(s)
      Mishima Y, Sato T, Ikeda T et al.
    • Organizer
      AABB
    • Place of Presentation
      Anaheim
    • Year and Date
      2015-10-24 – 2015-10-27
    • Int'l Joint Research
  • [Remarks] 東京大学医学部附属病院 輸血部

    • URL

      http://square.umin.ac.jp/traf-tky/

URL: 

Published: 2017-01-06  

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