2013 Fiscal Year Research-status Report
感覚毛成熟化におけるＦＧＦシグナルの役割～内耳再生に向けて
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25462638
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
喜多 知子 (嶋 知子) 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 研究員 (20362519)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中川 隆之 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (50335270)
本田 晶 独立行政法人理化学研究所, その他部局等, 研究員 (50443023)
RAJ Ladher 独立行政法人理化学研究所, その他部局等, その他 (70392173)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 内耳有毛細胞 / 感覚毛 / FGFR1 / stereocilia |
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| Research Abstract |
FGFR1阻害とstereocilia形態解析：Six1-creによるFGFR1 cKOマウス（３ヶ月齢）の形態解析の結果、蝸牛器官は有毛細胞、ラセン神経節ともに顕著な細胞数減少が認められた。一方、前庭器官ではコントロールと違わず正常の形態を示した。しかしながら、これはkinociliaに存在するFGFR1のKOによるものの可能性も含む。今後はAtoh1-creERを用いたlater stageのcKOモデルでの検討を進める。
細胞株を用いたFGFR1相互作用タンパクの同定：BMT10細胞株を用いたin vitro結合実験では、Pcdh15 のうちstereociliaに特異的に局在するisoform（CD3）とFGFR1 full lengthとが結合し、その結合は阻害剤（SU5402）添加により低下してCD3のリン酸化も消失した。よって、CD3とFGFR1との相互作用も確認された。今後、3'Raceから発見されたFGFR1のisoformsについて、その結合特性を調べる。
FGFR1相互タンパクの機能解析：LLC-PK1 clone4細胞を用いた検討では、Espin導入によりmicrovilliの伸長が見られたが、FGFR1full lengthおよびpcdh15 CD2の局在は主にprimary ciliaであった。FGFR1およびpcdh15のstereocilia特異的なisoformsを検討すべきか、もしくはモーター蛋白（myosin）との共発現が必要と考えられる。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
研究が遅れている最大の理由は、P7のマウス内耳における多様なisoformsの発現にある。P6時期の内耳にはFGFR1のfull lengthが存在せず、代わりに少なくとも３種類の短いisoformsが存在すると考えられる。またpcdh15 CD1がクローニングできていない。手段を改善しながら、これらをクローニングしコンストラクトを作成する予定である。また、AtohCre-ERによるlater stageのcKOマウスは、有毛細胞のうち100%がKOされるわけではないため、RYFPマウスとの交配により、GFPの有無よる正確な解析系を確立しつつある。
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| Strategy for Future Research Activity |
少し遅れをとっているので、スピードアップして研究を進めていきたい。
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[Journal Article] FGFR1-Frs2/3 signalling maintains sensory progenitors during inner ear hair cell formation.2014
Author(s)
Ono K, Kita T, Sato S, O'Neill P, Mak SS, Paschaki M, Ito M, Gotoh N, Kawakami K, Sasai Y, Ladher RK.
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Journal Title
PLoS Genet.
Volume: 10
Pages: e1004118
DOI
Peer Reviewed
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