2015 Fiscal Year Research-status Report

感覚毛成熟化におけるＦＧＦシグナルの役割～内耳再生に向けて

Research Project

Project/Area Number	25462638
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	喜多知子 (嶋知子) 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 研究員 (20362519)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	中川隆之京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (50335270) 本田晶国立研究開発法人理化学研究所, その他部局等, 研究員 (50443023) [Withdrawn] Raj Ladher 国立研究開発法人理化学研究所, その他部局等, その他 (70392173) [Withdrawn]
Project Period (FY)	2013-04-01 – 2017-03-31
Keywords	内耳 / FGFシグナル / 感覚毛
Outline of Annual Research Achievements	最初に、Case Western Reserve大学Algramam氏よりPcdh15-Tg2742(null)マウスの供与をうけて検討した。その結果、Pcdh15 nullマウスは、wild-typeと比べてFGFR1のstereocilaでの染色像に違いはなかった。また我々が用いている市販のPcdh15抗体は、kinociliaはspecificに染めるが、stereociliaの染色はノンスペの可能性もあり、染色像の観察において注意が必要と考えられた。次に、Atoh1-cre ERマウスによるconditional KOマウス作製について、R26R-YFPマウスを用いた検討を行った。出生後のベビーマウスにtamoxifenを腹腔内投与した場合、腹腔内から漏出する場合があり、KOの頻度にばらつきが見られた。そこで母マウスに経口ゾンデでtamoxifenを投与したところ、KOの頻度のばらつきは減った。また投与日数を１日から２日にすることにより、KOされる有毛細胞の比率は７０％となった。しかしながら、１００％でないため、KOされた細胞とKOされていない細胞を区別するのにR26R-YFPマウスを同時使用する必要性があった。それにより（緑：KOの区別、赤：stereociliaは固定されるので）、追加で染色できる分子が１つに限られることとなり、本実験でのこのAtoh1-cre ERマウスの使用の限界が認識された。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 3: Progress in research has been slightly delayed. Reason 研究分担者の所属ラボ（理化学研究所ＣＤＢ・感覚発生研究室）の閉鎖・移転に伴い、実験の進行が大幅に遅れた。
Strategy for Future Research Activity	昨年度の検討からAtoh1-cre ERマウスは使用が限られるので、今後の検討はSix1-creマウスで行う。あと残り１年なので、分子の相互作用に関する検討を進めたい。
Causes of Carryover	共同研究先のラボの閉鎖・移転（海外）に伴い、使用予定経費の消費が減ったため。
Expenditure Plan for Carryover Budget	本年度にやり残した事柄について検討する。すなわち、Six1-creを用いたマウスの解析ならびに、FGFR1の分子間相互作用に関するin vitro検討をメインに行う。