2014 Fiscal Year Research-status Report
口腔扁平上皮癌の浸潤開始スイッチ関連分子のプロテオーム解析
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25462849
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
程 クン 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (40207460)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山崎 学 新潟大学, 医歯学系, 助教 (10547516)
丸山 智 新潟大学, 医歯学総合病院, 講師 (30397161)
朔 敬 新潟大学, 医歯学系, 教授 (40145264)
阿部 達也 新潟大学, 医歯学総合病院, レジデント (70634856)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 口腔癌 / 扁平上皮癌 / 浸潤制御 / 実質ー間質 / 分子病理学 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
(1) 前年度に続いて、免疫組織細胞化学的実験と三次元再構築を実行した。口腔粘膜扁平上皮癌の外科摘出材料フォルマリン固定パラフィン包埋標本について、それぞれパールカンほかのECMあるいは細胞骨格・細胞死関連分子の免疫組織化学の結果をもとに、連続切片で、ECM分子とケラチン分子種とで腫瘍性間質と癌胞巣を識別し、バーチャルスライド法で写真撮影を行った。癌胞巣と腫瘍性間質の三次元的関連を明らかにし、浸潤癌の胞巣の連続性・分離性を検討すると共に腫瘍性間質の誘導レベルとの相関性について検討し、口腔癌の浸潤性の定義を客観的に行った。その結果をまとめて、国際誌に発表した。さらに、口腔癌角化胞巣についても連続切片法で解析し、いわゆる癌真珠の崩壊にいたる自然史を明らかにした。
(2) 組織切片の選択的切り出し回収も継続しておこなった。免疫組織化学的に描出した連続切片を参考にして、上皮内癌の側方進展部界面について、癌胞巣遠位端、癌胞巣側方界面、非癌上皮部界面、非癌上皮遠位端を区別して回収し、遺伝子ならびに蛋白質抽出実験に提供できるように準備し、プロテオーム解析では、癌胞巣界面において、インターリューキン等の扁平上皮細胞活性化サイトカインの上昇傾向などをみいだした。
(3)ヒト舌扁平上皮癌由来細胞MK-1、ZK-1、ZK-2細胞とOF-1などヒト由来株化線維芽細胞あるいはヒト末梢血由来単球を、直接・間接接触の単層共培養実験をおこない、混合比率や検索すべき分子・遺伝子のスクリーニングを行った。単層培養では、界面部を主体に、実質・間質胞巣について区別回収を試み、その効率化を検討した。新たに検討した分子はconnexin 43等のgap junction分子とclaudin 1・zonula occludens 1等のtight junction分子で、それらの蛍光抗体法による局在を確認した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
基本的に当初の研究の目的と計画に沿って実験を進めてきている。とくに、口腔粘膜扁平上皮癌の外科摘出材料フォルマリン固定パラフィン包埋標本について、連続性切片を作製し、パールカンをはじめとする細胞外基質関連分子の免疫組織化学的結果をもとに、癌細胞と腫瘍性間質の三次元構築を完成して、その実質と間質の相関性を検討した結果を論文にまとめて国際誌に発表した。口腔扁平上皮癌の浸潤の概念とその臨床的判定法に新たな局面を開き得たのは大きな成果であった。
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| Strategy for Future Research Activity |
前年度に引き続き、腫瘍細胞の三次元培養による解析方法を確立することが実現できておらず、来年度以降も、三次元解析を目標に実験を重ねて行く方針である。さらに、プロテオーム解析も症例を重ねてより精度の高いデータを蓄積していく予定である。
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| Causes of Carryover |
研究分担者朔 敬、丸山 智への配分した助成金で、それぞれ小額に残ったが、予定していた抗体の購入に不足したので、次年度の助成金に加えて使用することにした。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
上記のとおり、抗体購入の充てる予定である。
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