2013 Fiscal Year Research-status Report
早老症をモデルとした老化制御機構の解明に関する小児歯科的アプローチ
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25463187
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
山座 治義 九州大学, 歯学研究科(研究院), 講師 (30336151)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 小児歯科学 / 乳歯幹細胞 |
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| Research Abstract |
本研究課題では、脱落乳歯由来幹細胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth; SHED)の抗酸化ストレス作用および多分化能による抗老化作用の可能性を検索するとともに、老化制御機構の解明を目的とする。早期に老化現象が出現する早老症モデルマウスにSHEDやSHEDから分化誘導したインスリン産生β細胞を移植して、モデルマウスにける各臓器の活性酸素種の産生抑制や、寿命延長機構に重要な関連を示すインスリンシグナル伝達系を解析するとともに、老化制御に関与する遺伝子やシグナル伝達系の同定と解析を行う。以上のことから、本研究課題では小児歯科的アプローチによる老化現象の解明に挑む。
本年度はヒト乳歯歯髄から通法によりSHEDの単離・培養に成功した。SHEDの特性として、フローサイトメトリーを用いて幹細胞マーカー(STRO-1, CD146, CD73, CD105：陽性マーカー)や造血系マーカー(CD34, CD45, CD14, CD11b：陰性マーカー)の発現を確認した。SHEDのDoubling assayとBrdUを用いて自己増殖能の確認した。多分可能の解析として、象牙芽細胞/骨芽細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、神経細胞への分化誘導をin vitroで行い、組織特異的マーカーの発現を免疫染色法やウエスタンブロット法、RT-PCR法で検索を行った。
SHEDのβ細胞への分化誘導法を確立するために、骨髄由来間葉系幹細胞でのβ細胞への分化誘導法を参考に、SHEDのβ細胞への分化誘導法を行った。分化誘導後の細胞をRT-PCR法や免疫染色法、ウエスタンブロット法により、β細胞特異的マーカー(Insulin, Pdx-1, Nkx6.1, Glut2など)の発現を確認したが、結果は陰性であった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
老化モデルマウスを導入することにより、in vivoでの研究計画を予定していたが、動物飼育施設での微生物の感染報告があり、施設全体の使用が年度末まで停止していたことから、研究計画が遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
早老症モデルモデルを導入後、SHEDを移植後に以下の研究を進めていく。①各臓器におけるROS産生：肝臓、骨格筋、脂肪細胞、脾臓、心臓を採取し、通法に従い各臓器でのROS産生を測定する。②組織学的検索：採取した各臓器の組織切片を作成し、HE染色や特殊染色(PAS染色：多糖体の検索、マッソントリクローム染色：組織線維化の検索、その他)、免疫組織化学的検索(細胞死の検索、血管新生の検索など)を行い、各臓器の組織学的変化を解析する。③寿命集団の解析：SHEDを移植した雄モデルマウスのホモ接合体および野生型の体重や摂食量、各臓器の重量、血液データ(血糖値やインスリン、脂質、ASTやALT)、尿タンパク質量を経時的に測定し、SHED移植による肝機能や腎機能、代謝機能の変化を検索する。また、移植したモデルマウスの飼育を継続して、SHED移植したモデルマウスの寿命を解析する。
in vitroにおけるSHEDからβ細胞への分化誘導法を確立の確率を継続し、その特性の検索を行うとともに、モデルマウスへの移植を検討する。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
動物飼育施設の利用ができなかったことから、早老症モデル動物が導入できなかったため、次年度への使用額が生じた。
早老症モデル動物の導入及び飼育に用いる。
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[Presentation] 鼻腔内に過剰歯の萌出を認めた一例2013
Author(s)
眞田知基, 大隈由紀子, 小笠原貴子, 西垣奏一郎, 山座治義, 増田啓次, 柳田憲一, 野中和明
Organizer
第31回日本小児歯科学会九州地方会
Place of Presentation
福岡
Year and Date
20131020-20131020
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