2014 Fiscal Year Annual Research Report
ゲノム変異を指標とした生物学的被ばく線量推定法の開発
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25550033
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
吉浦 孝一郎 長崎大学, 原爆後障害医療研究所, 教授 (00304931)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 放射線 / 変異 / 生物学的測定法 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
目的は，生物学的被ばく線量測定法の開発（development of biological dosimetry method）である。放射線被ばく影響の定量的測定法としてゲノム変異を指標とする方法開発の基礎研究を行うことである。生物学的線量測定法は，染色体異常が出現頻度に頼るのが現状であり，高線量の被ばく時にしか利用できない。未だに感度の高い測定法はないので，本研究を提案した。
一細胞からゲノムDNAの基配配列を決定することが基本であるから，まずは少量のDNAからシーケンサーで解析可能なライブラリーの調製法を改良した。少量のDNAを鋳型としたDNA増幅にはdUTPを含んだdNTP mixを使用してphi29 DNA polymeraseによって全ゲノム増幅を行った。またライブラリー作製時のプロトコール作成のための酵素処理については，適切な酵素選定のために通常の耐熱性ポリメラーゼ（dUTPを含んでいても増幅可能なポリメラーゼ）を用いた。uracil DNA glycosylaseと他の種々の酵素によって断片化し，5’末端および3’末端は，引き続く酵素反応で5’-リン酸/3’-水酸基を付与した形で二本鎖DNAとすることが出来た。それら二本鎖DNAは，そのまま次世代シーケンサーの塩基配列決定用のライブラリーに調整できた。
しかし，残念ながら一細胞へ定量的に放射線照射して，その細胞毎にDNA変異数を測定して，ゲノム変異数と定量的な放射線照射の影響を測定するまでには至らなかった。
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Research Products
(13 results)
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[Journal Article] Heterozygous mutations in cyclic AMP phosphodiesterase-4D (PDE4D) and protein kinase A (PKA) provide new insights into the molecular pathology of acrodysostosis.2014
Author(s)
Kaname T, Ki CS, Niikawa N, Baillie GS, Day JP, Yamamura KI, Ohta T, Nishimura G, Mastuura N, Kim OH, Sohn YB, Kim HW, Cho SY, Ko AR, Lee JY, Kim HW, Ryu SH, Rhee H, Yang KS, Joo K, Lee J, Kim CH, Cho KH, Kim D, Yanagi K, Naritomi K, Yoshiura KI, Kondoh T, Nii E, Tonoki H, Houslay MD, Jin DK.
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Journal Title
Cellular Signaling
Volume: 26 (11)
Pages: 2446-2459
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] De novo SOX11 mutations cause Coffin-Siris syndrome.2014
Author(s)
Tsurusaki Y, Koshimizu E, Ohashi H, Phadke S, Kou I, Shiina M, Suzuki T, Okamoto N, Imamura S, Yamashita M, Watanabe S, Yoshiura K, Kodera H, Miyatake S, Nakashima M, Saitsu H, Ogata K, Ikegawa S, Miyake N, Matsumoto N.
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Journal Title
Nature Communications
Volume: 5
Pages: 4011
DOI
Peer Reviewed
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