PRRS感染耐過ブタ由来ファージ抗体ライブラリを用いた中和エピトープの探索

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25660226
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 五十嵐 樹彦 京都大学, ウイルス研究所, 教授 (90467431)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: ウイルス / ブタ / ワクチン / 抗体 / ファージディスプレイ / 中和 / ライブラリー

Outline of Annual Research Achievements

ブタ繁殖・呼吸障害症候群(PRRS)は、現在、養豚業に最も甚大な経済的被害をもたらしているウイルス性疾患である。妊娠ブタ及び肥育ブタが本ウイルス(PRRSV)に感染すると繁殖障害、間質性肺炎を伴う発育不良等重篤な病態を呈するが、成ブタでは呼吸器症状を呈するものの、耐過することが知られている。また、感染耐過ブタの血漿から調整した抗体の受動免疫でPRRSVの感染防御が可能な事も知られている。この感染防御抗体分子が認識する抗原決定基を同定する事で、個体感染の文脈においてウイルス複製抑制に真に有効な免疫原を明らかにできると考えた。本研究の目的は、感染耐過ブタに誘導された抗体を詳細に解析することで、より有効な抗PRRSVワクチンの免疫原を明らかにすることである。
弱毒化PRRSVを免疫後、野生型ウイルスの攻撃接種を感染防御した成ブタの感染5週後の肺門リンパ節細胞から総RNAを抽出し、オリゴdＴをプライマーとしてcDNAを合成した。抗体分子の重鎖および軽鎖(κ鎖およびλ鎖)の可変領域をコードするDNA断片をポリメラーゼ連鎖反応法により増幅し、リンカー配列を介して直鎖状に連結した分子(scFv)を合成した。これをファージミドベクター(pComb3XSS)に組み込みライブラリーを作製した。また、ウイルス粒子を抗原とするELISAの系を構築し、感染ブタの抗体と反応することを確認した。作製したライブラリー(約百万クローン)からウイルス粒子抗原に結合する性質を持つ抗体分子を選択するためにパンニング法による一次スクリーニングを3回試みたが、PRRSV抗原に結合する抗体分子を選択することはできなかった。今後の改善点としては、ELISAで抗体価の高い感染耐過ブタを選択して試みたり、ELISAの反応系や抗体ライブラリーの質とサイズの改善を行うことが考えられる。