2013 Fiscal Year Research-status Report
腸管腫瘍形成過程のKLF5/4複合体の統合的解析と核酸医薬による大腸癌治療法開発
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25670197
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
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| Research Institution | Tokyo Medical University |
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Principal Investigator |
黒田 雅彦 東京医科大学, 医学部, 教授 (80251304)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
仲矢 丈雄 東京医科大学, 医学部, 助教 (80512277)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | KLF4 / KLF5 / 大腸癌 / 癌幹細胞 |
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| Research Abstract |
1. FLAG-HAダブルタグ付きc-Myc・KLFノックインマウスの作成:申請者らは、KLF4の遺伝子座のN末端に3xFLAG-HAタグ配列を挿入されたターゲッティングベクターを作成した。さらに本ベクターをES細胞に導入して、相同組換えによりゲノム遺伝子座に正しく3xFLAG-HA配列を挿入されたES細胞クローンを得ることができた。このタグ付きKLF4タンパクを発現するES細胞クローンを胚にインジェクションし、現在このES細胞由来のキメラマウスを作成中である。今後KLF4ノックインマウスがin vivoでタグ付きKLF4タンパクを発現するかについて検証し、それらのマウスを用いて研究を進める予定である。
2. FLAG-HAダブルタグ付きES細胞におけるKLF5・KLF4・c-Myc・Tcl-7l蛋白複合体解析とCHIP sequence法による各蛋白複合体のDNA結合領域の解明:KLF4のダブルタグノックインES細胞の全タンパク抽出液を抗FLAG抗体ビーズで免疫沈降した産物を3xFLAGペプチド、酸、サンプルバッファーで溶出し、その免疫沈降産物中にFLAGタグ付きKLF4タンパクが含まれていることを、抗KLF4抗体、抗FLAG抗体を用いたWestern ブロッティング法で確認した。現在次世代シークエンサーによるDNA結合領域の網羅的な同定とを組み合わせた、CHIP sequence法を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
KLF4のノックインマウスの作成は順調である。一方KLF5に関しては組換え体の作成に苦慮している。
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| Strategy for Future Research Activity |
KLF5については、現在挿入配列を含め、どのようにすればタグ付きKLF5タンパクがノックインアリルから発現するかについて検証しているところである。
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| Expenditure Plans for the Next FY Research Funding |
納品が遅れたため。
次年度に購入する。
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[Journal Article] KLF5 regulates the integrity and oncogenicity of intestinal stem cells.2014
Author(s)
Nakaya T, Ogawa S, Manabe I, Tanaka M, Sanada M, Sato T, Taketo MM, Nakao K, Clevers H, Fukayama M, Kuroda M, Nagai R.
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Journal Title
Cancer Research
Volume: Epub ahead of print
Pages: in press
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Activin receptor-like kinase5 inhibition suppresses mouse melanoma by ubiquitin degradation of Smad4, thereby derepressing eomesodermin in cytotoxic T lymphocytes.2014
Author(s)
Jeong-Hwan Yoon, Su Myung Jung, Seok Hee Park, Mitsuyasu Kato, Tadashi Yamashita, In-Kyu Lee, Katsuko Sudo, Susumu Nakae, Jin Soo Han, Ok-Hee Kim, Byung-Chul Oh, Takayuki Sumida, Masahiko Kuroda, Ji-Hyeon Ju, Kyeong Cheon Jung, Seong Hoe Park, Dae-Kee Kim, and Mizuko Mamura.
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Journal Title
EMBO molecular Medicine.
Volume: 5
Pages: 1720-1739
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Correlation between number of renal cysts and aortic circumferences measured using autopsy material.2013
Author(s)
Kurata A, Inoue S, Ohno S, Nakatsubo R, Takahashi K, Ito T, Kawasaki K, Kokubo R, Sakai T, Ubukata J, Matsubara S, Muraoka R, Yamazaki J, Hirose T, Hojo M, Watanabe E, Kuroda M.
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Journal Title
Pathol Res Pract.
Volume: 209
Pages: 441-447
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Classification of secondary corneal amyloidosis and involvement of lactoferrin.2013
Author(s)
Kaoru Araki-sasaki, Koji Hirano, Yasuhiro Osakabe, Masahiko Kuroda, Kazuko Kitagawa, Hiroshi Mishima, Hiroto Obata, Masakazu Yamada, Naoyuki Maeda, Kohji Nishida, Shigeru Kinoshita.
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Journal Title
Ophthalmology
Volume: 120
Pages: 1166-1172
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] SMAD2 MEDIATES DENDRITIC CELL SUPPRESSION BY TGF-β Smad2 is the TGF-β receptor-regulated Smad to suppress the immunogenicity of mouse and human dendritic cells.2013
Author(s)
Jeong-Hwan Yoon, Katsuko Sudo, Jin Soo Han, Min-Young Chae, Seok Hee Park, Michael Weinstein, Susumu Nakae, Tadashi Yamashita, In-Kyu Lee, Takayuki Sumida, Masahiko Kuroda, and Mizuko Mamura.
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Journal Title
European Journal of Immunology -2
Volume: in press
Pages: in press
DOI
Peer Reviewed
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