腸管腫瘍形成過程のKLF5/4複合体の統合的解析と核酸医薬による大腸癌治療法開発

2014 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 25670197
• Research Institution: Tokyo Medical University
• Principal Investigator: 黒田 雅彦 東京医科大学, 医学部, 教授 (80251304)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 仲矢 丈雄 東京医科大学, 医学部, 助教 (80512277)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: KLF4 / KLF5 / 大腸がん / がん幹細胞

Outline of Annual Research Achievements

1. FLAG-HAダブルタグ付きc-Myc・KLFノックインマウスの作成:申請者らは、KLF4の遺伝子座のN末端に3xFLAG-HAタグ配列を挿入されたターゲッティングベクターを作成した。さらに本ベクターをES細胞に導入して、相同組換えによりゲノム遺伝子座に正しく3xFLAG-HA配列を挿入されたES細胞クローンを得ることができた。このタグ付きKLF4タンパクを発現するES細胞クローンを胚にインジェクションし、現在このES細胞由来のキメラマウスを作成した。このKLF4ノックインマウスがin vivoでタグ付きKLF4タンパクを発現することをマウス組織から採取した蛋白のWestern Blottingで確認した。これらのマウスを用いて研究を進める予定である。KLF5については、挿入配列を含め、どのようにすればタグ付きKLF5タンパクがノックインアリルから発現するかについて検証しマウスを作成している。

2. FLAG-HAダブルタグ付きES細胞におけるKLF5・KLF4・c-Myc・Tcl-7l蛋白複合体解析とCHIP sequence法による各蛋白複合体のDNA結合領域の解明:KLF4のダブルタグノックインES細胞の全タンパク抽出液を抗FLAG抗体ビーズで免疫沈降した産物を3xFLAGペプチド、酸、サンプルバッファーで溶出し、その免疫沈降産物中にFLAGタグ付きKLF4タンパクが含まれていることを、抗KLF4抗体、抗FLAG抗体を用いたWestern ブロッティング法で確認した。現在次世代シークエンサーによるDNA結合領域の網羅的な同定とを組み合わせた、CHIP sequence法を準備している。

Research Products

• [Journal Article] Ovarian small cell carcinoma of pulmonary type appearing in ante mortem ascites: An aoutopsy case and review of the literature. (2015)
  • Author(s): Hashimoto H, Kurata A, Fujita K, Shimada H, Nagai T, Horiguchi H, Kuroda M
  • Journal Title: Human Pathology Volume: EHPC-00037 Pages: EHPC-00037
  • DOI: doi: 10.1016/j.ehpc.2015.02.003.
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Angiopoietin-like 7 is an anti-angiogenic protein required to prevent vascularization of the cornea. (2015)
  • Author(s): Toyono T, Usui T, Yokoo S, Taketani Y, Nakagawa S, Kuroda M, Yamagami S, Amano S.
  • Journal Title: PLoS One Volume: 10 Pages: e0116838
  • DOI: doi: 10.1371/journal.pone.0116838.
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Inhibition of choroidal fibrovascular membrane formation by new class of RNA interference therapeutic agent targeting periostin. (2015)
  • Author(s): Nakama T, Yoshida S, Ishikawa K, Kobayashi Y, Zhou Y, Nakao S, Sassa Y, Oshima Y, Takao K, Shimahara A, Yoshikawa K, Hamasaki T, Ohgi T, Hayashi H, Matsuda A, Kudo A, Nozaki M, Ogura Y, Kuroda M and Ishibashi T.
  • Journal Title: Gene Therapy Volume: 22 Pages: 127-137
  • DOI: doi: 10.1038/gt.2014.112.
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Immaturity of mooth muscle cells in the neointima is associated with acute coronary syndrome. (2015)
  • Author(s): Horita A, Kurata A, Ohno S, Shimoyamada H, Saito I, Kamma H, Kuroda M.
  • Journal Title: Cardiovasc Pathol Volume: 24 Pages: 26-32
  • DOI: doi:10.1016/j.carpath.2014.09.003
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Evaluation of the Human Papillomavirus mRNA Test for the detection of cervical lesions in Japan. (2015)
  • Author(s): Nakayama Y, Yamada M, Kurata A, Kiseki H, Kuroda M.
  • Journal Title: Eur J Gynaec Oncol Volume: in press Pages: inpress
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Unique expression pattern of viral proteins in human herpesvirus 8-positive plasmablastic lymphoma: a case report. (2014)
  • Author(s): Yamada M, Katano H, Yotsumoto M, Hashimoto H, Muramatsu T, Shiotsuka M, Fukutake K, Kuroda M.
  • Journal Title: Int J Clin Exp Pathol. Volume: 7 Pages: 6415-6418
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] In vivo challenging of polymyxins and levofloxacin eye drop against multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa keratitis. (2014)
  • Author(s): Tajima K, Miyake T, Koike N, Hattori T, Kumakura S, Yamaguchi T, Matsumoto T, Fujita K, Kuroda M, Ito N, Goto H.
  • Journal Title: J Infect Chemother. Volume: 20 Pages: 343-349
  • DOI: doi: 10.1016/j.jiac.2013.10.015.
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Multifocal Kaposiform Hemangioendothelioma in Multiple Visceral Organs: An Autopsy of 9-Day-Old Female Baby. (2014)
  • Author(s): Takeo Nakaya, Kiyoko Morita, Atsushi Kurata,Tetsuo Ushiku, Takashi Igarashi, Masahiko Kuroda, Masashi Fukayama.
  • Journal Title: Human Pathology. Volume: 45 Pages: 1773-1777
  • DOI: doi: 10.1016/j.humpath.2014.03.019
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Young-age-onset pancreatoduodenal carcinoma in Shwachman-Diamond syndrome. (2014)
  • Author(s): Nakaya T, Kurata A, Hashimoto H, Nishimata S, Kashiwagi Y, Fujita K, Kawashima H, Kuroda M.
  • Journal Title: Pathol Int Volume: 64 Pages: 75-80
  • DOI: doi: 10.1111/pin.12133.
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Presentation] 浸潤性乳癌に出現するlet-7d発現細胞の検討． (2015)
  • Author(s): 藤田浩司、山田正俊、高梨正勝、黒田雅彦．
  • Organizer: 第104回日本病理学会総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2015-04-30 – 2015-05-02
• [Presentation] 肺線維症に対するmiR-29b 補充療法． (2015)
  • Author(s): 山田侑子、高梨正勝、須藤カツ子、上田しのぶ、黒田雅彦．
  • Organizer: 第104回日本病理学会総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2015-04-30 – 2015-05-02
• [Presentation] 胃癌細胞株の形態変化における、上皮間葉系移行に関わるマイクロRNA200cとその標的の検出 (2015)
  • Author(s): 倉田 厚、山田正俊、大野慎一郎、橋本浩次、藤田浩司、高梨正勝、黒田雅彦．
  • Organizer: 第104回日本病理学会総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2015-04-30 – 2015-05-02
• [Presentation] 肺がん治療を想定した副作用の少ない短鎖型新規核酸医薬の開発. (2015)
  • Author(s): 大野慎一郎、板野華蓮、原田裕一郎、浅田浩太朗、老川桂生、柏迫幹絵、高梨正勝、須藤カツ子、池田徳彦、黒田雅彦.
  • Organizer: 第104回日本病理学会総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2015-04-30 – 2015-05-02
• [Presentation] microRNA 生成経路を欠損する肺がん細胞株の解析． (2015)
  • Author(s): 老川桂生、浅田浩太朗、大野慎一郎、黒田雅彦．
  • Organizer: 第104回日本病理学会総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2015-04-30 – 2015-05-02
• [Presentation] Development of novel form of mimic microRNA for lung cancer therapy. (2015)
  • Author(s): Ohno S, Itano K, Harada Y, Asada K, Oikawa K, Kashiwazako M, Takanashi M, Sudo K, Ikeda N, Kuroda M.
  • Organizer: AACR Annual Meeting 2015.
  • Place of Presentation: Philadelphia, Pennsylvania, USA
  • Year and Date: 2015-04-18 – 2015-04-22
• [Presentation] The development of short form of mimic microRNA for lung cancer therapy. (2014)
  • Author(s): Kuroda M.
  • Organizer: 26th EORTC-NCI-ACR Symposium.
  • Place of Presentation: Barcelona, SPAIN
  • Year and Date: 2014-11-18 – 2014-11-21
• [Presentation] 肺がんを効果的に抑制するMimic microRNAの新規形状の探索. (2014)
  • Author(s): 大野慎一郎、板野華蓮、原田裕一郎、高梨正勝、須藤カツ子、池田徳彦、黒田雅彦.
  • Organizer: 第55回日本肺癌学会学術集会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2014-11-14 – 2014-11-16
• [Presentation] エクソソームによるドラッグデリバリーシステムの応用 (2014)
  • Author(s): 黒田雅彦、高梨正勝、大野慎一郎.
  • Organizer: 第6回日本RNAi研究会(JARI)、 第1回日本細胞外小胞学会(JSEV).
  • Place of Presentation: 広島
  • Year and Date: 2014-08-28 – 2014-08-30
• [Presentation] 浸潤性乳癌組織中に認めるhsa-let-7d発現細胞の出現意義について. (2014)
  • Author(s): 藤田浩司、原田裕一郎、黒田雅彦.
  • Organizer: 第11回日本病理学会カンファレンス
  • Place of Presentation: 六甲山
  • Year and Date: 2014-08-01 – 2014-08-02
• [Presentation] がんを効果的に抑制する短縮型Mimic microRNA の開発. (2014)
  • Author(s): 大野慎一郎、板野華蓮、原田裕一郎、高梨正勝、須藤カツ子、黒田雅彦.
  • Organizer: 第33回分子病理学研究会
  • Place of Presentation: 宮城
  • Year and Date: 2014-07-25 – 2014-07-26
• [Presentation] Colon cancer stem cells and microRNA signature during cokon cancer development. (2014)
  • Author(s): Kuroda M.
  • Organizer: 2nd International Symposium 2014
  • Place of Presentation: Seoul, KOREA.
  • Year and Date: 2014-07-07 – 2014-07-07
  • Invited
• [Presentation] 自己由細胞由来のエクソソームによるドラッグデリバリーシステムへの応用. (2014)
  • Author(s): 高梨 正勝、上田 しのぶ、須藤 カツ子、石川 章夫、黒田 雅彦.
  • Organizer: 第103回日本病理学会総会
  • Place of Presentation: 広島
  • Year and Date: 2014-04-24 – 2014-04-26