2013 Fiscal Year Research-status Report
「胚盤胞補完による異種キメラ臓器再生」～マウス生体内にラット幹細胞由来心臓を作製
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25670388
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Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
李 鍾國 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 寄附講座准教授 (60303608)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 臓器再生 / 胚盤胞補完 / 多能性幹細胞 / キメラ動物 / 心筋転写因子 |
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| Research Abstract |
① 心臓形成転写因子欠損マウス：Nkx2.5 ノックアウトマウス（Terami et al. Biochem Biophys Res Commun 2007）のヘテロマウスNkx2.5(+/-)を入手し、繁殖した。その後、Nkx2.5(+/-)マウス同士を交配し、2.5 dpcの受精卵を採取した。② マウス蛍光標識ES細胞：DsRed標識ES細胞を未分化状態で維持培養した。③胚盤胞への細胞移植：上記①で採取し、培養した受精卵（胚盤胞）に、②のES細胞を顕微鏡下で注入した。その後、卵割を確認した後で、仮親マウスの子宮への移植を行った。④同種キメラマウス心の形態・機能評価 (in vivo実験)：上記③で仮親マウス子宮内に移植した受精卵から受精後胎仔について、蛍光実体顕微鏡を用いてDsRed陽性細胞の分布を調べた。④同種キメラマウス心の形態・機能評価 (in vitro実験)：上記③で仮親マウス子宮内に移植した胎仔マウス（１４個体）について、心臓および全身臓器を固定し、蛍光標識した野生型マウスES細胞あるいはマウスiPS細胞の分布を調べた。その結果１個体（胎仔）において、心臓全体でDs-Redによる蛍光が観察され、マウス同種による胚盤胞補完が生じた可能性が示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
Nkx2.5(+/-)マウスの繁殖、交配し、受精卵（２卵割期）採取の実験を頻回に実施していたが、受精卵を抱卵していることが極めて少なく、また、繁殖スペースも限られていたため、実際にES細胞を受精卵に移植する実験を実施できる回数が限られていることが理由。
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| Strategy for Future Research Activity |
Nkx2.5(+/-)マウスの繁殖スペースを新たに確保し、交配できる維持個体数を増やすとともに、交配とこの遅れを取り戻すために繁殖数を増やすして、最大限の努力を引き続き行う。その上で、受精卵が順調に採取できるようになったら、同種キメラマウス心の形態評価に加え、機能評価実験を、胎仔および出生後の新生仔、さらに生後２週齢、４週齢、８週齢のマウスについて、実施する。さらに、心臓構成細胞中どのタイプの細胞に蛍光標識細胞が見られるかを観察する。さらに、蛍光標識心筋細胞の電気生理特性をOptical mapping法、単離心筋細胞のCa感受性/電位感受性色素を用いたイメージング実験により調べる。また、同種ES細胞での胚盤胞補完が確認できたら、マウス-ラット異種ES、マウス-ラット異種iPS（ラットiPSをマウス受精卵に移植）ついての実験を行う。
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[Journal Article] Notch activation mediates angiotensin II-induced vascular remodeling by promoting the proliferation and migration of vascular smooth muscle cells.2013
Author(s)
Ozasa Y, Akazawa H, Qin Y, Tateno K, Ito K, Kudo-Sakamoto Y, Yano M, Yabumoto C, Naito AT, Oka T, Lee JK, Minamino T, Nagai T, Kobayashi Y, Komuro I
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Journal Title
Hypertens Res
Volume: 36
Pages: 859-65.
DOI
Peer Reviewed
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