アポトーシス死細胞貪食による口腔扁平上皮癌細胞の増殖・浸潤の分子機構

2013 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 25861740
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 山崎 学 新潟大学, 医歯学系, 助教 (10547516)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: 口腔癌 / 病理学 / アポトーシス / 貪食 / MFG-E8

Research Abstract

本年度は以下の実験をおこなった。
１. MFG-E8過剰発現細胞の作製：MFG-E8を高発現する口腔扁平上皮癌(SCC)由来培養細胞ZK-1のcDNAライブラリーよりMFG-E8 バリアント1・2のcDNA全長配列を増幅し、pcDNA3.1/CT-GFP TOPOベクターにライゲーションした。配列を確認後、MFG-E8低発現性SCC培養細胞であるZK-2, SAS, HSC-4に一過性遺伝子導入をおこなった。導入48時間で、遺伝子および蛋白レベルで導入MFG-E8の過剰発現が確認された。 蛍光顕微鏡観察の結果、50%以上の導入効率が得られ、導入MFG-E8は内因性蛋白質と同様、おもに細胞質内に局在していた。
２. MFG-E8過剰発現細胞の機能解析：上記3種の培養細胞に遺伝子導入後、MTS法により経時的に細胞増殖活性を測定したが、有意な変化は認められなかった。一方、トランスウェル遊走試験・マトリジェル浸潤試験にて、遊走および浸潤細胞の増加が確認された。
３. 試験管内貪食実験：UV照射によりアポトーシスを誘導した蛍光標識Jurkat細胞を上記のMFG-E8過剰発現細胞と共培養し、蛍光顕微鏡およびフローサイトメトリーにて、アポトーシス細胞貪食を観察した。その結果、MFG-E8過剰発現細胞で貪食細胞率が増加し、貪食されたアポトーシス細胞周囲への導入MFG-E8の濃縮が認められた。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

MFG-E8過剰発現口腔SCC細胞において、遊走浸潤能およびアポトーシス細胞貪食の亢進が確認されたことより、仮説の根幹部分の証明ができ、研究計画が妥当であったと評価している。

Strategy for Future Research Activity

本年度の成果より、当初の研究方向性に変更はなく、次年度も引き続き実験を進めたい。具体的には、本年度に作製したMFG-E8過剰発現系にて、アポトーシス細胞貪食後の癌細胞の増殖・遊走浸潤・代謝におよぼす影響について解析する。

Research Products

• [Journal Article] Intramuscular keratocyst as a soft tissue counterpart of keratocystic odontogenic tumor: differential diagnosis by immunohistochemistry. (2013)
  • Author(s): Abe T, Maruyama S, Yamazaki M, Essa A, Babkair H, Mikami T, Shingaki S, Kobayashi T, Hayashi T, Cheng J, Saku T.
  • Journal Title: Human Pathology Volume: 45(1) Pages: 110-118
  • DOI: doi.org/10/1016/j.humpath.2013.08.011
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Hybrid ameloblastoma and adenomatoid odontogenic tumor: report of a case and review of hybrid variations in the literature. (2013)
  • Author(s): Yamazaki M, Maruyama S, Abe T, Babkair H, Fujita H, Takagi R, Koyama J, Hayashi T, Cheng J, Saku T.
  • Journal Title: Oral Surgery, Oral Medicine, Oral Pathology, Oral Radiology Volume: － Pages: －
  • DOI: doi.org/10/1016/j.oooo.2013.08.032
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Identification of a soluble isoform of human IL-17RA generated by alternative splicing. (2013)
  • Author(s): Sohda M, Misumi Y, Tashiro K, Yamazaki M, Saku T, Oda K.
  • Journal Title: Cytokine Volume: 64(3) Pages: 642-645
  • DOI: doi: 10.1016/j.cyto.2013.09.012.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Podoplanin-mediated cell adhesion through extracellular matrix in oral squamous cell carcinoma. (2013)
  • Author(s): Tsuneki M, Yamazaki M, Maruyama S, Cheng J, Saku T.
  • Journal Title: Laboratory Investigation Volume: 93(8) Pages: 921-932
  • DOI: doi: 10.1038/labinvest.2013.86.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Podoplanin is a novel myoepithelial cell marker in pleomophic adenoma and other salivary gland tumors with myoepithelial differentiation. (2013)
  • Author(s): Tsuneki M, Maruyama S, Yamazaki M, Essa A, Abe T, Babkair HA, Ahsan MS, Cheng J, Saku T.
  • Journal Title: Virchows Archiv Volume: 462(3) Pages: 297-305
  • DOI: doi: 10.1002/jcp.24364.
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 口腔底腫瘍 (2013)
  • Author(s): 山崎 学, 程 クン, 丸山 智, 阿部達也, 池田順行, 永田昌毅, 高木律男, 西山秀昌, 林 孝文, 朔 敬
  • Organizer: 第24回 日本臨床口腔病理学会
  • Place of Presentation: 東京都 日本大学
  • Year and Date: 20130828-20130830
• [Presentation] MFG-E8は口腔扁平上皮癌の進展と死細胞貪食を促進する (2013)
  • Author(s): 山崎 学, 程 クン, 丸山 智, 阿部達也, 朔 敬
  • Organizer: 第102回日本病理学会
  • Place of Presentation: 札幌市 ロイトン札幌
  • Year and Date: 20130606-20130608