2015 Fiscal Year Annual Research Report
多機能性コレクチンCL-K1はDICにおいてどのような役割を担うのか
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26293124
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| Research Institution | Asahikawa Medical College |
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Principal Investigator |
若宮 伸隆 旭川医科大学, 医学部, 教授 (20210867)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松下 操 東海大学, 工学部, 教授 (00165812) [Withdrawn]
松田 泰幸 旭川医科大学, 医学部, 助教 (10532252)
森 健一郎 旭川医科大学, 医学部, 助教 (70610236)
鈴木 定彦 北海道大学, 学内共同利用施設等, 教授 (90206540)
大谷 克城 旭川医科大学, 医学部, 准教授 (90396367)
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| Project Period (FY) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | collectin / DIC / 補体 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
申請者らが発見したコレクチンCL－K1は、従来のコレクチン同様、自然免疫機能をもつことが推測されている。しかし、近年の常染色体遺伝病のゲノム解析の結果やCL－K1 KOマウス作成による予備研究により、個体発生や成長発育にCL－K1が関与する可能性が窺われている。申請者らが積み上げてきた補体関連分子コレクチン研究が、凝固線溶系ホルモン調節機能の解析に展開する、新たな研究は全く独創的であり、コレクチンの臨床応用の為、生体の恒常性維持に関与する、コレクチンの新規機能に関する知見を得ることが本研究の目的である。下記にある3つのプロジェクトが平成27年度はすすめられた。
1.凝固線溶系解析プロジェクトでは、主に、北大でのDIC関連患者からの血液で、新たな倫理申請書に基づいて、検体を採取し、その検体について血中MBL、CL－K1濃度解析を行った。マウス凝固線溶系におけるCL－K1役割解析は、CL－K1 KOマウスの個体を増やすことを今年度は行った。
2.形態形成と恒常性維持機能解析プロジェクトは、野生型とCL－K1 KOマウスの表現型比較検討を主に骨格系を中心に行った。
3.発生におけるCL－K1の機能解析とそのメカニズムの解析では、出生後、24時間の脆弱性について野生型とKOマウスにおいて、形態観察（写真撮影）を経時的に行い、出生直後致死の原因を探索した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
申請者らが発見したコレクチンCL－K1は、従来のコレクチン同様、自然免疫機能をもつことが推測されている。しかし、近年の常染色体遺伝病のゲノム解析の結果やCL－K1 KOマウス作成による予備研究により、個体発生や成長発育にCL－K1が関与する可能性が窺われている。下記にある3つのプロジェクトが平成27年度はすすめられた。
1.凝固線溶系解析プロジェクトでは、主に、北大でのDIC関連患者からの血液で、血中MBL、CL－K1解析を行った。マウス凝固線溶系におけるCL－K1役割解析は、CL－K1 KOマウスの個体を増やすことを今年度は行った。
2.形態形成と恒常性維持機能解析プロジェクトは、野生型とCL－K1 KOマウスの表現型比較を小動物用CTを利用して骨格を中心に検討した。
3.発生におけるCL－K1の機能解析とそのメカニズムの解析では、出生直後の死亡についての検討を行った。
上記3つの課題において、まず凝固線溶系解析プロジェクトにおいては、アメリカMGHとほぼ同様の結果が得られており、人種間の差はない普遍性のある結果であることが分かった。形態形成と恒常性維持機能解析プロジェクトでは、北大遺伝子制御研究所にある小動物専用のCTscan測定により、骨格の異常を示唆するデータが得られている。発生におけるプロジェクトでは、出生直後24時間以内の死亡が約30％に確認できた。特に、肉眼的には死亡マウスに大きなアノマリーは発見できなかった。このようにすべての研究はおおむね順調に進んでいる。
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| Strategy for Future Research Activity |
＜凝固線溶系解析プロジェクト＞＜1＞1.北大での新規に得られたDIC関連患者からの血液で、血中MBL,CL－K1解析を行い、測定結果から、日本人DIC患者においての血中CL－K1との相関性を確認、判定する。次に、血中MBL,CL－K1とその他の生化学等の測定値との変化を比較解析し、血中MBL,CL－K1とその他のデータとの変化をDICの病状や転帰等での比較解析を行う。＜2＞マウス凝固線溶系におけるCL－K1役割解析、ラットDICモデルを、マウスDICモデルに置き換え、CL－K1 KOマウスでの差異を解析する。
＜形態形成と恒常性維持機能解析プロジェクト＞＜1＞野生型とCL－K1 KOマウスの表現型比較検討を行う。1.発生における表現型解析をさらにすすめる。
＜発生におけるCL－K1の機能解析とそのメカニズムの解明＞1.wt－CL－K1－GFP TGマウスを利用した発現部位および細胞の同定、作成したTGマウスを用いて人工授精を行い、胚盤胞後期までin vitro培養条件下で蛍光観察を行う。2.CL－K1の機能および関連因子の同定によるメカニズムの解明、CL－K1 KOマウスの表現型解析において、野生型と異なる表現型を示す部位に着目し、wt－CL－K1－GFP TGマウスの発現部位と照らし合わせCL－K1の発生における機能を明らかにする。
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| Causes of Carryover |
平成27年度、後半期に研究が進展し、種々雑多の物品費等の支出を行ったが、直接経費769円未支出が発生しました。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
平成28年度に使用予定の研究費と合算して物品費に支出させていただきます。
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[Journal Article] Molecular basis of sugar recognition by collectin-K1 and the defects caused by mutations associated with 3MC syndrome.2015
Author(s)
Venkatraman Girija U, Furze CM, Gingras AR, Yoshizaki T, Ohtani K, Marshall JE, Wallis AK, Schwaeble WJ, El-Mezgueldi M, Mitchell DA, Moody PC, Wakamiya N, Wallis R
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Journal Title
BMC Biol
Volume: 13
Pages: 27
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Collectin CL-LK is a novel soluble pattern recognition receptor for Mycobacterium tuberculosis.2015
Author(s)
Troegeler A, Lugo-Villarino G, Hansen S, Rasolofo V, Henriksen ML, Mori K, Ohtani K, Duval C, Mercier I, Bénard A, Nigou J, Hudrisier D, Wakamiya N, Neyrolles O
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Journal Title
PLoS One
Volume: 10
Pages: e0132692
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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